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1、液体一级母种的制备马铃薯20%蛋白Jj东0.1%酵母膏0.15%葡萄糖1.2%蔗糖1.3%KH2P041%MgSOJH?。0・05%VB,0.01%按上述配制母种液体培养基，然后分装于500ml的三角瓶屮，每瓶装液200ml,用封口膜封口。在高压灭菌锅121°C下灭菌30mino冷却后接斜面试管菌种，在超净工作台上每瓶接0.5cm3大小的三块菌种到三角瓶中。将接种后的三角瓶置于26°C恒温箱内培养两天，然后震荡培养（转速140r/min温度26°C）,当接种后从第三天开始要经常检查是否冇杂菌污染。瓶内产生细小而稠密的菌丝球时终止培养，制的液体一级菌种
2、。不同液体培养基配方的的制备葡萄糖3%玉米粉5%酵母粉0.15%KH.PO,0.1%MgSO.0.05%VB.0.01%木屑0%木屑0.5%木屑1%木屑1.5%1234按上述配制培养基每个配方处理重复3次，然后分装于500ml的三角瓶屮，每瓶装液200ml,用封口膜封口。在高压灭菌锅121°C下灭菌30mino冷却后每一•瓶中分别接种液体一级菌种15ml,将接种后的三角瓶置于26°C恒温培养箱（转速140r/min温度26°C）,瓶内产生细小而稠密的菌丝球时终止培养。同理，按上述操作，将木屑分别改为杨树木屑和石榴树木屑，其余步骤相同。纤维素酶酶活测定
3、:试剂：纤维素酶PH4.5乙酸-乙酸钠缓冲液0.5%CMC蒸憎水DNS标准葡萄糖液lmg/ml配制试剂:1•DNS显色液：称取lOgDNS,溶入蒸憾水中，加入20g分析纯NaOH,200g酒石酸钾那，加水500ml,升温溶解后,加入重蒸酚2g,无水Na2S030.5g,加热搅拌，待全容后冷却,定容至1000mlo存于棕色瓶中，放置一周后使用。2•标准葡萄糖溶液：称取500干燥至恒重的葡萄糖lOOmg,溶解后定容至lOOmlo步骤：1•空白管:取lml蒸馆水沸水浴5min冷却后加3ml0.5%CMC2•样品管：取三只试管分别加入3mlO.5%CMC,l
4、ml酶液，混匀。与空白管同时置于50°C水浴锅中水浴30min取出，沸水浴10min,冷却后加入3mlDNS显色液，再沸水浴10min冷却后定容至25ml混匀,与标准曲线同时在550nmT测0D值。3•标准曲线绘制:取六支试管分别加入葡萄糖0、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml,1.0ml,各管加蒸憎水共lml,再分别加入去离子水lml,在分别加入DNS3ml,沸水浴10min,冷却后定容至25ml,550nm下测0D值。计算：三个样品管取平均值，纤维素酶活力（u/g）=rXDfX2X1000/V式中：r：通过0D550mn值从标准曲线上
5、查得与标准葡萄糖溶液相对应的浓度（ug/ml）V：试验时移取得酶液的体积Df：稀释倍数（注：酶活力值保留3位）表一管试、号剂123456葡萄糖标(ml)0.00.20.40.60.81.0蒸馆水(ml)1.00.80.60.40.20.0定容后总体积(ml)252525252525光密度0D550nm表二试试管剂空白管样品管1样品管2样品管3酶液(ml)1111CMC(ml)3333显色液(ml)3333定容后总体积(ml)25252525光密度0D550nm酯酶同工酶酶活力测定info(一)试剂1、30%丙烯酰胺混合液(Acr:Bis为29:1)
6、称取丙烯酰胺(Acr)29g及甲叉丙烯酰胺(Bis)1.0g,用去离子水溶解并稀释至100ml,贮棕色瓶中于4°C保存，可用一个月。2、1.5mol/LpH8.8Tris-IICl缓冲液取lmol/LIICL溶液48ml.三疑甲基甲烷(Tris)36.6g,加咫蒸饰水至80ml使其溶解,调pH至&8,然后用双蒸饰水稀释至100ml,置棕色瓶屮，4°C贮存。3、1.0mol/LpH6.8Tris-HCl缓冲液取lmol/LHCL溶液48ml,Tris5.98g,加双蒸馆水至80ml,调pH6.8,用双蒸憾水稀释至100ml,置棕色瓶中，4°C贮存。(查
7、)4、Tris-甘氨酸电泳缓冲液称取Tris6g.甘氨酸28.8g,加蒸憎水850ml,调pH至&3,加蒸憎水到1000ml,4°C贮存。用时可做10倍稀释。5、10%过硫酸讓(AP)(6)四甲基乙二胺(TEMED)或B-二甲基氨基丙JJ青(DMAPN)。6、10%SDS(十二烷基磺酸钠)称取SDS10g,加蒸憾水100ml使其溶解。(查)7、四甲基乙二胺(TEMED)8、上样缓冲液取1・0mol/LpH6.8Tris-HCl缓冲液6.25ml,蔗糖10g,SDS2.3g,lg/L漠酚蓝10ml,加蒸丫留水溶解，混合至100mlo10、脱色液：取冰醋
8、酸7.5ml.甲醇5ml,加蒸饰水至100mlo（二）凝胶制备按卜表分别配制分离胶和浓缩胶（重点查）分离胶（
