酶在疾病诊断方面的进展研究杨宇轩(精选)

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1、酶在疾病诊断方面的进展研究杨宇轩孙利芹*（烟台大学生命科学学院生物工程系，山东烟台264005）摘要：酶试剂方法中决定试剂质量的关键是工具酶的质量，而工具酶的主产工艺乂是决定其质量利产率的关键因素，因而国内外学者付出了辛勤的劳动，力求选育高产菌株（包括构建棊因工程菌），探索最优化的发酵工艺和后提取纯化技术，以捉高酶的产率，保证原酶质量。工具酶的发酵牛产和纯化技术涉及微牛物工程、酶工程和分子牛物学工程领域的专门知识和技术经验，需精密仪器设备，具技术垄断的特点，技术难度相当人。为便于诊断用酶研究生产和临床化学工作者了解医学检验诊断试剂中工具酶的研究现状和进展，现将近

2、10年来冇关技术资料作一综述，以供参考。关键词：疾病诊断；治疗；应丿IJ；1诊断试剂新工具酶的菌种选育和生产工艺研究十分活跃诊断试剂工具酶的研制是酶制剂工业中的一个小的属枝，同工业用酶相比较，其对底物的专一性更严格,纯度要求高，但用屋冇限，不易形成很大的生产规模。可喜的是，近10年來一些技术条件较优越的科研院所，很重视这--领域的开创性研究工作，有十儿种医学检验中急需的工具酶已经培育出产酶繭株,学握了发酵制备及酶提纯工艺，并对酶的理化性质作了必要的研究，为解决这些工具酶的国产化生产产提供了技术保证。表1列举了近10年來报道的若干项垂要诊断试剂工具酶研究的国内外文

3、献资料，并对这些酗的菌种來源、分布特点、主要用途、工艺技术完善程度及主要技术创新等进行简要的述评。表1近10年來国内外研制成的诊断试剂工具解工具酶名称來源分布主要应用价值工艺技术完善程度及主要创新特点文献來源普通变形杆菌胞内血清丿求索测定试剂盒经30L发酵罐放大培养,优化发酵条件[1]芽胞杆菌胞内血清丿求素测定试剂盒经摇瓶发酵培养用尿素诱&提高产率[2]脂酶皱落假丝酵母胞外血清TG测定试剂盒（对TG水解完全）经摇瓶培养，使用疏水层析技术分离[3]筍萄糖氧化点青霉AS.3.3871胞外血葡萄糖测定试剂盒经38L发酵罐放大培养，使用超滤技术等⑷已糖激酶面包酵母胞内肌

4、酸激酶测左试剂盒使用细胞溶涨、冻溶超声粉碎技术[5]胆红素氧化酶疣疱漆斑菌胞外血清胆红素测定试剂盒优化发酵条件，100ml摇瓶培养⑹胆红素氧化酶疣疱漆斑菌胞外血清胆红素测定试剂盒摇瓶培养，菌种经紫外线诱变，提高产率[7]谷氨酸脱氢酶天津短棒菌T6-13胞内血清尿素测定连续检测法试剂盒对菌种进行诱变处理及摇瓶培养[8]脂肪酶猪胰胞内血清TG测定试剂盒卿理化性质及应用研究较为深入[9]乳酸氧化酶粪链球菌胞内乳酸测定试剂盒加入Tritonx-100破壁效果好[10]胆固醇酯酶假单砲菌胞外血清胆固醇测定试剂盒使用超滤分离技术等[11]胆固醇氧化酶节杆菌82菌株胞外血清胆

5、固醇测定试剂盒产酶条件及后提纯丁•艺优化[12]L-谷氨酸氧化酶放线菌P-26胞外血清rGT测定试剂盒优化产酶条件L13]谷氨酸脱氢酶猪肝胞内血清尿素测定试剂盒纯化工艺及酶稳定性研究[14]甘油激酹嗜热脂肪芽他杆菌胞内定屋检测甘油试剂盒应用STPT-il蓝色染料配基层析等分离技术[15]a-磷酸甘油脱氢酶兔肌胞内血清片油三酣酶偶联试剂盒建立了液-液双水相提取新技术等[16]甘油氧化酶日本曲霉AT008胞内血淸TG测定试剂盒发酵罐放大培养[17]卄油氧化酶青霉Ts-622胞外血清TG测定试剂盒麦鉄固体培养[18]廿汕磷酸氧化陋气球菌属变异株血清TG测定试剂盒优化培

6、养条件[19]胆固醇氧化酶红球菌属胞外血清胆固醇测定试剂盒优化培养和分离条件[20]肌酸酶基因來自黄杆菌sup-188肌酸、肌酊测定试剂盒构建成基因工程菌并完成基因表达[21]肌酸酊酶基因来自假单砲菌属sp.ps-7肌酊测定试剂盒构建成里因丄程菌并进行表达[22]分析上述文献资料，对当前诊断试剂工具嗨研究发展趋势可以得出以下儿点印象：1.1通过诱变技术和底物诱导作用等方法，选育出稳定、高产的优良菌株是决定微生物发酵工程成败的关键所在。这对常规发酵生产或进行基因工程菌的构建都是如此。而培育出一种价值很高的目的菌株，是一种能够产生高效益的重大科技创新，应给予重视和支

7、持。1.2寻找产生胞外酶的菌种，能为酶的提取纯化（下游工程）提供极大的便利。因为胞内酶分离中遇到大量菌体蛋口的干扰，使分离纯化程序复杂化，加大了目的嗨的损失。而胞外嗨无需破碎细菌细胞，培养液中杂蛋H量少，可用较为简捷的分离纯化方法加以捉纯。1.3对传统的酶分离纯化工艺进行改进，采用温和、高效的生化新技术，如超滤技术、疏水层析技术等，能够显著提高冃的卿的纯度和产率。1.4深化酶理化特性的研究，为诊断试剂配制中」E确使用工具酶提供科学依据，是当前研究中一项紧迫的任务。1.5开辟工具酶的新用途，建立新的临床化学酶分析方法，以代替准确性和精密度均较差的化学方法，是一项很

8、冇意义的技术创新。当前已