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1、苦参中黄酮类成分高效液相指纹图谱和5种成分含量测定［摘要］采用高效液相色谱法建立苦参中黄酮类成分的指纹图谱，并同时测定3种异戊烯基黄酮（苦参醇I、苦参酮、槐属二氢黄酮G）和2种紫檀素（三叶豆紫檀昔和高丽槐素）的含量。色谱条件采用ULTIMATEXB-C18色谱柱（4.6mmX250mm,5um）,乙月青-水溶液为流动相进行梯度洗脱，以295nm为检测波长。共收集了12批苦参和4批同属近缘种山豆根进行测定，运用中国药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价软件2004AB”进行评价，对黄酮类成分进行主成分分析，并对主要5种成分进行含量测定。
2、建立了苦参黄酮类成分HPLC指纹图谱，标定了13个共有色谱峰，并采用对照品指认了5个主要色谱峰，4批同属近缘种山豆根与苦参黄酮对照图谱明显不同。主成分分析的结果表明，苦参酮、槐属二氢黄酮G等对其质量影响显著。含量测定条件通过方法学验证，平均加样回收率在96.3%〜102.3%o该法所建立的苦参黄酮类成分指纹图谱特征性强、方法简便，结合主要成分含量测定可更好地控制其质量，对苦参的鉴定及质量控制具有指导意义和参考价值。［关键词］苦参；黄酮；高效液相色谱；指纹图谱；主成分分析［收稿日期］2013-03-26［基金项目］国家自然科学基金项目(
3、81225025)；广东高校优秀青年创新人才培养计划项目(LYM11079)［通信作者］*李梢，教授，Tel:(010)62797035,E-mail：shaoli@mai1.tsinghua・edu.cn［作者简介］马鸿雁，博士，讲师，E-ma订：hongyan203@126.com中药苦参为豆科槐属植物苦参SophoraflavescensAit.的干燥根,具清热利尿、燥湿杀虫的功效［1］。苦参也是中药多种复方如苦参丸(《圣济总录》、《普济方》)、清络饮［2］的主要药物。苦参中的化学成分主要为生物碱和黄酮2大类，早期化学研究主要侧
4、重在苦参生物碱类成分，近年来的研究开始关注其所含的异戊烯基黄酮类化合物上，并发现这类化合物具有广泛的生理作用和药用价值［3-4］o现有标准和文献大多以苦参碱和氧化苦参碱等作为定性和定量指标对该药材进行质量评价［1,5］o这2种生物碱并非苦参独有，同属近缘药材如山豆根S.tonkinensis也含有该类成分。山豆根具清热解毒、消肿利咽功效，与苦参明显不同，但两味药材均以苦参碱和氧化苦参碱作为定性和定量指标［1］,缺乏专属性。苦参中含有的黄酮成分主要是以苦参酮为代表的异戊烯基二氢黄酮，这类成分具有抗菌、抗磷酯酶活性、抗肿瘤、抗心律失常等多
5、种生物活性，并且具有很明显的化学分类学特征［6-11］o关于苦参中黄酮成分的分析，文献报道较多的是用紫外分光光度法测定总黄酮，及采用高效液相法测定三叶豆紫檀昔、苦参酮、降苦参酮、苦参唳等含量[5,12-19]o但关于槐属二氢黄酮G、苦参醇I和高丽槐素这3种成分的含量测定，以及基于苦参黄酮类成分的指纹图谱进行比较苦参和山豆根差异研究，目前尚未见报道。本文从指纹图谱和指标成分含量测定两方面同时对药材质量进行定性和定量评价，旨为苦参质量的全面评价提供参考和依据。1材料Waterse2695型高效液相色谱仪，配备四元梯度泵、在线真空脱气机、自
6、动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器。KQ-250DB数控超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)，BP211D型分析天平(SatoriusCo.Ltd.,德国)。乙睛(色谱纯，Merck公司)，纯净水(Watsons),甲醇为分析纯(上海国药集团试剂有限公司)。对照品苦参酮(Kuarinone)、槐属二氢黄酮G(SophoraflavanoneG)、苦参醇I(KushenolI)、三叶豆紫檀昔(Trifolirhizin)＞高丽槐素(Maackiain)对照品自制，经HPLC峰面积归一化法计算，纯度均大于98%o供含量测定用乙睛为色谱纯
7、，其余试剂均为分析纯。12批苦参药材和4批山豆根药材于2011-2012年各地采集原植物，晒干其根备用，均由广东药学院姬生国教授鉴定，见表1。表1苦参和山豆根样品来源Table1OriginsofSophoraflavescensandS.tonkinensissamples2方法与结果2.1色谱条件ULTIMATEXB-C18色谱柱(4.6mmX250mm,5um)；流动相乙惰(A)-水(B),梯度洗脱，0〜25min,40%〜50%A；25〜30min,50%〜70%A；30〜40min,70%A；40〜50min,70%〜40%
8、A；柱温35°C；流速1mL・min-1；检测波长295nm；进样量10uL,色谱图见图1。1.三叶豆紫檀昔；2•高丽槐素；3.苦参醇I；4.苦参酮;5.槐属二氢黄酮Go图1对照品(A)和苦参样品(B)HPLC图Fig.
