DB21∕T 2357-2014 A型口蹄疫病毒核酸RT-PCR检测方法

DB21∕T 2357-2014 A型口蹄疫病毒核酸RT-PCR检测方法

ID:45028789

大小:156.31 KB

页数:9页

时间:2019-11-08

DB21∕T 2357-2014 A型口蹄疫病毒核酸RT-PCR检测方法_第1页
DB21∕T 2357-2014 A型口蹄疫病毒核酸RT-PCR检测方法_第2页
DB21∕T 2357-2014 A型口蹄疫病毒核酸RT-PCR检测方法_第3页
DB21∕T 2357-2014 A型口蹄疫病毒核酸RT-PCR检测方法_第4页
DB21∕T 2357-2014 A型口蹄疫病毒核酸RT-PCR检测方法_第5页
资源描述:

《DB21∕T 2357-2014 A型口蹄疫病毒核酸RT-PCR检测方法》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库

1、ICS11.220B41DB21辽宁省地方标准DB21/T2357—2014A型口蹄疫病毒核酸RT-PCR检测方法RT-PCRassayforFoot-and-mouthdiseasevirusserotypeAnucleicacid2014-07-29发布2014-09-29实施辽宁省质量技术监督局发布DB21/T2357—2014前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由辽宁省动物疫病预防控制中心提出。本标准由辽宁省畜牧兽医局归口。本标准起草单位:辽宁省动物疫病预防控制中心、辽宁

2、省动物医学研究院。本标准主要起草人:顾贵波、王宏燕、曹东、薛树山、杨作丰、石霖、杨本勇、李红魁、王克才、吴运谱、郑洪玲、闫海滨、马永春、王国庆IDB21/T2357—2014A型口蹄疫病毒核酸RT-PCR检测方法1范围本标准规定了A型口蹄疫病毒(FMDV-A)RT-PCR检测方法的技术要求。本标准规定的RT-PCR方法适用于检测偶蹄动物的水疱皮、水疱液、淋巴结、脊髓等组织样品及食道-咽部分泌物(O-P液)。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于

3、本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。分析实验室用水规格和试验方法口蹄疫诊断技术规范兽医实验室生物安全技术管理规范3缩略语下列缩略语适用于本标准。FMDV-A(Foot-and-mouthdiseasevirusserotypeA)A型口蹄疫O-P(Oesophagus-pharyngeal)食道-咽部分泌物DEPC(Diethypyrocarbonate)焦炭酸二乙酯EDTA(EthyleneDiamineTetraaceticAcid)乙二胺四乙酸dNTP(de

4、oxy-ribonucleosidetriphosphate)脱氧核苷酸三磷酸EB(Ethidiumbromide)溴化乙锭TAE(Tris/Acetate/EDTA)TAE缓冲液PBS(PhosphateBufferedSaline)磷酸盐缓冲液RNA(Ribonucleicacid)核糖核酸DNA(Deoxyribonucleicacid)脱氧核糖核酸cDNA(complementarydeoxyribonucleicacid)互补脱氧核糖核酸RT-PCR(Reverse-transcription

5、polymerasechainreaction)反转录-聚合酶链式反应PCR(PolymeraseChainReaction)聚合酶链式反应TaqDNApolymeraseTaqDNA聚合酶4原理FMDV是一种RNA病毒。RNA反转录产生的cDNA可作为PCR模板进行扩增。根据FMDV-A保守基因序列设计一对引物,在TaqDNApolymerase催化下,以母链DNA为模板,以引物为延伸起点,通过变性、退火和延伸,体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA。1DB21/T2357—20145实验器材眼科

6、剪、眼科镊、1.5mL灭菌离心管(经DEPC水处理)、0.2mL薄壁PCR管、500mL量筒、500mL三角瓶、吸头、分析天平、台式低温高速离心机、PCR仪、电泳仪、电泳槽、凝胶成像仪、冰箱、微波炉、组织研磨器、微量移液器。6试剂6.1TRIzolRNA提取试剂或其他商品化的RNA提取试剂。6.2氯仿、异丙醇、无水乙醇。6.31%琼脂糖凝胶(见附录A中A.1)。6.4溴化乙锭(EB,10µg/µL)溶液(见附录A中A.2)。6.550×TAE电泳缓冲液(见附录A中A.3)。6.6焦炭酸二乙酯(DEPC)

7、处理的灭菌双蒸水(DEPC水)(见附录A中A.4)。6.7DNA分子量标准(DL2000Marker)。6.875%乙醇(用DEPC水配制)(见附录A中A.5)。6.9上样缓冲液。6.101×TAE电泳缓冲液。6.11磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/L、pH7.2)(见附录A中A.6)。6.1250%甘油磷酸盐缓冲液(见附录A中A.7)。6.13商品化的一步法或两步法RT-PCR反应试剂。含有:10U/µLAMV反转录酶、50U/µLRNA酶抑制剂、5U/µLTaqDNApolymerase、25m

8、mol/L硫酸镁(MgSO4)溶液、5×RT-PCR缓冲液、2.5mmol/LdNTP混合物、10×RT缓冲液、10×PCR缓冲液、25mmol/L氯化镁(MgCL)和无RNA酶的水。注:除另有规定,所用试剂均为分析纯,水为符合GB/T6682-2008的灭菌双蒸水或超纯水。7引物7.1上游引物:5′-CTTGCACTCCCTTACACCGCG-3′,引物浓度10pm/µL。7.2下游引物:5′-CATGTCCTCTTGCATCTGGTT-

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文

此文档下载收益归作者所有

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文
温馨提示:
1. 部分包含数学公式或PPT动画的文件,查看预览时可能会显示错乱或异常,文件下载后无此问题,请放心下载。
2. 本文档由用户上传,版权归属用户,天天文库负责整理代发布。如果您对本文档版权有争议请及时联系客服。
3. 下载前请仔细阅读文档内容,确认文档内容符合您的需求后进行下载,若出现内容与标题不符可向本站投诉处理。
4. 下载文档时可能由于网络波动等原因无法下载或下载错误,付费完成后未能成功下载的用户请联系客服处理。