DB21∕T 1890-2001 鸡马立克氏病诊断技术规程

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1、ICS65.020.30B41DB21辽宁省地方标准DB21/T1890—2011鸡马立克氏病诊断技术规程RegulationsofdiagnotictechniquesforMarek’sdisease点击此处添加与国际标准一致性程度的标识2011-01-17发布2011-02-01实施辽宁省质量技术监督局发布DB21/TXXX—2011前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则并起草。本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由辽宁省动物疫病预防控制中心提出。本标准由辽宁省畜牧兽医局归口。本

2、标准起草单位:辽宁省动物疫病预防控制中心、辽宁省动物医学研究院。本标准主要起草人:陈瑶顾贵波段亚良王竹李清竹薛树山赵培邓文超6DB21/TXXX—2011鸡马立克氏病诊断技术规程1 范围本标准规定了鸡马立克氏病(MD)的临床症状与病理变化、实验室诊断和综合判定。本标准适用于辽宁省境内的一切从事鸡类饲养、经营和鸡类产品生产、经营以及从事动物防疫活动的单位和个人对鸡马立克氏病的诊断、疫病监测及流行病学调查。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于

3、本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T18643-2002鸡马立克氏病诊断技术标准SN/T1454-2004鸡马立克氏病病毒分离与鉴定方法NT/T905-2004鸡马立克氏病强毒感染诊断技术3 临床症状与病理变化3.1 临床症状3.1.1 神经型病鸡步态不稳,发生不全或完全麻痹,不能站立,蹲伏地上,并且两腿前后伸展呈“劈叉”姿势。3.1.2 皮肤型病鸡多在颈部、翅膀和大腿外侧体表毛囊腔形成结节及小的肿瘤状物。3.1.3 眼型病鸡一侧或两侧眼睛失明,瞳孔边缘

4、不整齐呈锯齿状,虹彩消失,眼球如鱼眼,呈灰白色。3.1.4 内脏型病鸡精神萎靡,呆顿,食欲下降,明显消瘦,常缩颈蹲在墙角下。羽毛松乱无光泽,皮肤苍白,排绿色稀便。3.2 病理变化3.2.1 神经型外周神经肿胀,呈半透明水肿样,色泽变淡,横纹消失,其肿胀程度一般为正常神经的2倍~3倍。这些变化多发生在腰荐神经丛、坐骨神经丛、臂神经丛、颈部迷走神经丛等部位。6DB21/TXXX—20111.1.1 皮肤型以皮肤的羽毛囊为中心,形成半球形隆起的肿瘤,其表面有时可见鳞片状棕色痂皮。1.1.2 眼型虹膜呈环状或

5、斑点状褪色,出现淡灰色;瞳孔不规则,有时偏向虹膜一侧。1.1.3 内脏型以内脏出现肿瘤为特征,其中肝脏、腺胃的发生率最高。1.2 病理组织学变化1.2.1 采集病鸡肿胀的外周神经和内脏的肿瘤组织样品,按常规方法制备石蜡切片、苏木素伊红(HE)染色。通过普通光学显微镜进行病理组织学观察判定。1.2.2 根据病变组织中浸润细胞的种类及形态学,外周神经病理组织学变化可分为A、B、C三个型。在同一只鸡的不同神经会出现不同的病变型。A型病变表现为淋巴母细胞,大、中、小淋巴细胞及巨噬细胞的增生浸润。B型病变表现神

6、经水肿,神经纤维被水肿液分离,水肿液中多为小淋巴细胞、浆细胞和许旺氏细胞增生。C型病变为水肿和轻度小淋巴细胞增生。1.2.3 内脏和其他组织的肿瘤与A型神经病变相似,为大小各异的淋巴细胞增生。2 实验室诊断2.1 病毒分离与鉴定操作方法按SN/T1454-2004执行。2.2 琼脂扩散试验检测技术操作方法按GB/T18643-2002;NT/905-2004执行。2.3 聚合酶链式反应试验2.3.1 材料2.3.1.1 样品的采集与处理无菌采集病鸡的全血、皮肤、皮屑、脾等内脏器官,在4℃~8℃尽快送往

7、检测单位。在无菌室内将样品充分研磨,并加入0.04mol/LPBS(ph7.4)制成1:5悬液,3000r/min离心10min,取上清备用。阳性对照可选用马立克活疫苗。2.3.1.2 试剂及引物TaqDNA聚合酶,dNTP,DL2000DNAMarker,琼脂糖,核酸提取试剂DNAzol,无水乙醇,ddH2O,75%乙醇。引物为上游5'TGCGATGAAAGTGCTATGGAGG3';下游5'GAGAATCCCTATGAGAAAGCGC3'。目的片段大小为185bp、317bp或449bp中的一个或

8、二个或三个目的片段。2.3.2 方法6DB21/TXXX—20111.1.1.1 样品DNA的提取阳性对照与样品同时提取DNA,实验应使用ddH2O水作为阴性对照。a)取处理好的样品200μL加入1.5mL离心管中,加入800μLDNAzol病毒裂解液,颠倒混匀,室温放置3min。b)10000r/min离心10min。c)上清转移至另一离心管内,加500μL无水乙醇,混匀,室温放置3min。d)10000r/min离心5min。e)弃上清,加1mL75

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