组织培养实验指导书(精)

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1、实验一组培器皿及器械的洗涤、灭菌及环境的消毒一、实验目的通过实验，使学生了解并掌握组织培养用实验器肌及器械的洗涤、灭菌，坏境的消毒方法。二、实验原理实验仪器及器械的清洗、消毒和灭菌是组织培养成功的关键所在，是外植体免受污染的前捉。由丁•灭菌剂的种类不同，所以选择消毒剂既要考虑良好的消毒、杀菌作用，同时易被蒸傭水冲洗掉。无菌的环境是植物组织培养成功的前提，因为绝大多数操作程序耍求在无菌条件下进行。三、实验操作步骤(-)器皿与用具的洗涤1、玻璃器皿的洗涤新购置的玻璃器皿或多或少都含有游离的碱性物质。使用前要先用1%稀HCL浸泡一夜，再用肥皂水洗净，清水冲洗后，再用蒸憾水冲洗1次，晾干后备用。用过

2、的玻璃器血，用清水冲洗，蒸憾水冲洗一次，干后备用即可。对于已被污染的玻璃器皿则必须在高压蒸汽灭菌后，倒去残渣，用毛刷刷去瓶壁上的培养液和病斑后，再用清水冲洗干净，蒸镭水冲淋一遍，晾干备用，切忌不可用水直接冲洗，否则会造成培养环境的污染。清洗后的玻璃器皿，瓶壁应透明发亮，内外壁水膜均一，不挂水珠。2、金属用具的洗涤新购置的金属用具表面上有一层油腻，需擦净油腻后再用热肥皂水洗净，清水冲洗后，擦干备用。用过的金属用具，用清水洗净，擦干备用即可。3、每人清洗部分玻璃器皿清水洗净f浸入洗衣粉溶液中洗刷f清水反复冲洗f蒸憾水淋一遍f烘干备用。对于较脏玻璃器皿的洗涤：采用先碱后酸的方法，即用洗衣粉洗刷后冲

3、洗干净一晾干一浸入酪酸洗液(一种强氧化剂，去污能力强，配制方法：重銘酸钾40克，溶解在500ml在水中，然后徐徐加入450ml粗制浓硫酸)，浸泡时间视器皿的肮脏程度而定一清水反复冲洗干净一蒸憾水淋洗一遍一烘干备用。对于带有石蜡或胶布的器皿：先将其除去，再用常规洗涤，石蜡用水煮沸数次即可去掉，胶布粘着物则需用洗衣粉液煮沸数小时，再用水冲洗，凉干后浸入洗液，以后的步骤同前。（-）玻璃器皿、用具及环境的灭菌1、玻璃器1111和用貝的灭菌（1）采用干热灭菌法：将洗干净晾干后的培养皿、三角瓶、吸管等玻璃用具和解剖针、解剖刀、铁了等金屈器具，用纸包好，放进电热烘干箱，当温度升至100°C时，启动箱内鼓风

4、机，使电热箱内的温度均匀。当温度升至150°C时，定时控制40min（或120°C定时120min），达到灭菌目的。（2）采用高压蒸汽灭菌法：即用手提式高压灭菌锅，在1.2个大气压下保持15〜20分钟。有些如聚丙烯、聚甲基戊烯等类型的塑料用貝也可以进行高温消毒。（3）灼烧灭菌：用于无菌操作的银子、解剖刀等用具除高压蒸汽灭菌外，在接种过程中还常常采用灼烧灭菌，将钱了、解剖刀等从浸入95%酒糟中取出，置于酒精灯火焰上灼烧，借助酒精瞬间燃烧产生高热來达到杀菌等目的。操作过程中要反复浸泡、灼烧、放凉、使用，操作完毕后，用具应擦拭干净后再放置。2、环境的消毒（1）地面、墙壁和工作台的灭菌每次使用前，将

5、配好的20%新洁尔灭（苯扎澳鞍）溶液倒入喷雾器中，对接种室地面、墙壁、角落均匀地喷雾。在喷房顶时间，注意不要让药液滴入眼睛。然后开启紫外灯开关，照射15〜30min,一般紫外线消毒后不要立即进入，应在关闭紫外灯15-20min后进入室内。（2）无菌室和培养室的灭菌消毒灭菌的方法：首先将房了关闭，定期用甲醛和高猛酸钾2：1的比例定期熏蒸灭菌24h或用70%的酒精或0.5%苯酚喷雾降尘和消毒。操作时要戴好口罩和手套，用甲醛与高镭酸钾配比时耍注意避开烟雾，封闭消毒期间不宜进入消毒空间。三、实验报告1.将本次实验内容整理成实验报告。2.试阐述为什么要对器血和用具进行严格的洗涤和灭菌？实验二培养基母液

6、的配制与保存（MS培养基）一、实验目的通过学习MS培养基母液的配制与保存，常握培养基母液浓度的换算、配制与母液的保存方法。二、实验原理培养基制备之前，为了使用方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物类、激素类分别配制成比培养基配方需耍量大若干倍的母液。当制备培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母液即可。三、实验仪器、用具及试剂（-）实验仪器、器皿及用具电子天平（感量为O.OOOlg、O.Olg）,烧杯（1000ml,100ml,50ml）、量筒（1000ml,100ml,50ml）、容量瓶（1000ml,500ml,200ml,100ml,50ml）、棕色或白色广口瓶（1000

7、ml,500ml,200ml,100ml）＞药匙、玻璃棒、称量纸、标签、冰箱。（-）试剂MS培养基所需各种试剂、IAA、IBA、NAA、6-BA、2,44）、GA?、KT、蒸馅水、重蒸谓水。四、实验步骤与方法母液的配制是按所使用药晶的类别，而分别配成大量元素、微量元素、维生素、钙盐、镂盐和铁盐等。配制母液时特别要注意无机盐成分在一起，可能产生的化学反应，如C評和SO?-,Ca2+,Mg2+和P0广一起溶解后,