第二十章高效液相色谱法(改动)

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1、分析化学教程第二十章高效液相色谱法(1)§20.1概述§20.2高效液相色谱法的分类与基本原理20.2.1高效液相色谱法的分类20.2.2基本原理§20.3各类高效液相色谱法20.3.1液－固吸附色谱法20.3.2液－液分配色谱法20.3.3化学键合相色谱法20.3.4其他色谱法§20.4固定相20.4.1液－固色谱固定相20.4.2化学键合相20.4.3其他固定相§20.5流动相（溶剂系统）20.5.1分离方程式20.5.2Snyder溶剂分类20.5.3正相洗脱与反相洗脱20.5.4洗脱方式20.5.5流动相最优化方法简介§20

2、.6高效液相色谱仪20.6.1输液泵20.6.2色谱柱与进样器20.6.3检测器20.6.4超高效液相色谱仪§20.7定性、定量分析方法20.7.1定性分析方法20.7.2定量分析方法高效液相色谱法概述高效液相色谱法HPLC（highperformanceliquidchromatograph）高压输液泵高效固定相高灵敏度检测器高效液相色谱法与经典液相色谱法的比较见表高效液相色谱法与GC的比较见表高效液相色谱法的分类与基本原理20.2.1高效液相色谱法的分类按固定相的聚集状态：LLC和LSC按分离机制：分配、吸附、离子交换（IEC）

3、、空间排阻（SEC）、亲合（AC）、手性（CC）、胶束（MC）、电色谱法（EC）。HPLCLSCLLCNLLC和RLLCBPC（狭）RBPCNBPCISC一般RBPCPICIEC一般IECICAA（氨基酸分析法）SECGPC和GFCAC（亲和）MC（胶束）CC（手性）20.2.2高效液相色谱法的基本原理HPLC的范氏方程：讨论：涡流扩散项：填料和填充均匀程度高效液相色谱柱的装填纵向扩散项传质阻力项温度一般为室温选甲醇、乙腈粘度小的溶剂粒径综上所述，HPLC应采用：1)采用小粒径、窄粒度分布的球形固定相，首选化学键合相，用均浆法装柱；

4、2）采用低粘度流动相，低流速（1ml/min)；3）柱温一般以25～35度为宜。太低，则流动相的粘度增加，温度高易产生气泡。流速分析型HPLC一般流量为1mL/min。各类高效液相色谱法20.3.1液－固吸附色谱法分离机理溶质分子与流动相分子竞争吸附吸附剂表面吸附活性中心，靠溶质分子的分配系数（容量因子）不同而分离。影响容量因子的因素溶质分子的极性溶剂的极性硅胶的活性若以硅胶为固定相：洗脱剂：以烷烃为底剂，加适量极性调整剂组成的二元或三元流动相。流动相应该不含水。20.3.2液－液分配色谱法分离机理靠样品组分溶入固定相与流动相达到“

5、平衡”后分配系数的差别而分离。正、反相液－液色谱法注意流出顺序。目前，物理涂渍的液－液色谱几乎已被化学键合相所取代。20.3.3化学键合相色谱法将固定液的官能团键合在载体表面，就构成化学键合相。以化学键合相为固定相的色谱法称为化学键合相色谱法，简称键合相色谱法（bondedphasechromatograph，BPC）化学键合相的优点均一、稳定；不易流失，使用周期长；柱效高；重现性好。反相键合相色谱法（RBPC或RHPLC）固定相：在载体表面键合含弱极性或中等极性的基团，如十八烷基硅烷（C18）（ODS柱）、辛烷基（C8）、甲基（－

6、CH3）、苯基等。流动相：以水做主体，加适量的极性调节剂增加选择性如甲醇、乙腈、四氢呋喃等。出峰顺序：极性强的组分先出柱，极性弱的组分后出柱。分析对象：分离非极性至中等极性的各种分子型化合物。影响保留时间的因素：溶质的分子结构：极性越弱，保留时间越长。流动相的表面张力、介电常数和pH值：对于二元或多元体系改变溶剂的配比可改变流动相的表面张力和介电常数。通常，流动相中有机溶剂含量增加，k变小。例如：在水－甲醇体系中增加甲醇的量，可降低表面力和介电常数，使容量因子变小。正相键合相色谱法固定相：在载体表面键合含中等极性或较强极性的基团，如

7、氰基（－CN）、氨基（—NH3）、或二羟基等。流动相：以非极性或弱极性的溶剂如己烷、庚烷等为主体，加适量的极性调节剂增加选择性如乙醚、氯仿、二氯甲烷等。出峰顺序：极性弱的组分先出柱，极性强的组分后出柱。影响保留时间的因素：键合相的种类、流动相的强度、试样的性质。流动相的极性增强，洗脱能力增加，保留时间缩短。适应范围：分离溶于有机溶剂的极性至中等极性的分子型化合物。反相离子对色谱法（RPIC）写成通式：表：反相离子对色谱的离子对试剂序号反离子种类主要应用对象1季铵盐（如四丁基铵磷酸盐TBA、溴化十六烷基三甲基铵（CTAB）强酸、弱酸、

8、磺酸染料、羧酸、氢化可的松及其盐2叔铵（如三辛铵）磺酸盐、羧酸等3烷基磺酸盐（如甲基、戊基、己基、庚基、樟脑磺酸盐）强碱、弱碱、儿茶酚胺、鸦片碱等4高氯酸胺5烷基磺酸盐（如十二烷基磺酸盐、正庚烷基磺酸钠（PICB7)与3类似，选择性不