BJS201801食用油脂中辣椒素的测定

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1、附件食用油脂中辣椒素的测定BJS2018011范围本方法规定了食用油脂中辣椒素（天然辣椒素、合成辣椒素、二氢辣椒素）含量的液相色谱-串联质谱测定方法。本方法适用于食用油脂中辣椒素（天然辣椒素、合成辣椒素、二氢辣椒素）含量的测定。2原理试样经二氯甲烷溶解，氢氧化钠水溶液提取酸化后，过固相萃取柱净化，采用液相色谱-串联质谱仪检测，外标法定量。3试剂和材料除另行规定外，水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1乙腈（CH3CN）：色谱纯。3.1.2甲醇（CH3OH）：色谱纯。3.1.3甲酸（CH

2、2O2）：质谱级。3.1.4二氯甲烷（CH2Cl2）：色谱纯。3.1.5氢氧化钠（NaOH）：分析纯。3.1.6浓硫酸（H2SO4）：98%，分析纯。3.2溶液配制3.2.10.1%甲酸水溶液：取甲酸（3.1.3）1mL用水定容至1000mL，用滤膜（0.22µm，水相）过滤后备用。3.2.20.1%甲酸乙腈溶液：取甲酸（3.1.3）1mL用乙腈（3.1.1）定容至1000mL,用滤膜（0.22µm，有机相）过滤后备用。3.2.32%氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠（3.1.5）溶于1000mL水中，

3、摇匀备用。3.2.4稀硫酸（1+15）溶液：取10mL浓硫酸（3.1.6）缓缓倒入150mL水中，搅拌均匀备用。3.3标准品天然辣椒素、合成辣椒素、二氢辣椒素标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见附录A表A.1，纯度≥98%。3.4标准溶液配制3.4.1标准储备液：分别称取天然辣椒素、合成辣椒素、二氢辣椒素标准品（3.3）0.1g（精确至0.0001g），用甲醇（3.1.2）溶解，并转移至100mL容量瓶中，定容至刻度，标准储备液浓度为1mg/mL。贮存于4℃冰箱中，有效期3个

4、月。3.4.2混合标准系列工作液：分别准确吸取标准储备液（3.4.1）适量于容量瓶中，用甲醇（3.1.2）将其稀释成含量分别为0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL和100ng/mL的标准系列混合工作液。临用时配制。3.5C18固相萃取（SPE）小柱：1000mg，6mL，或等效SPE柱。1仪器和设备4.1高效液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）：配有电喷雾离子源。4.2超声波清洗器。4.3分析天平：感量为0.0001g。4

5、.4离心机：转速≥4000r/min。4.5涡旋混合器。2分析步骤5.1试样制备准确称取1g（精确至0.0001g）样品于10mL具塞塑料试管中，加入1mL二氯甲烷（3.1.4），再加入3mL2%氢氧化钠溶液（3.2.3），涡旋提取10min，4000r/min离心10min，取上层水相；残留有机相再用3mL2%氢氧化钠溶液重复提取一次，合并水相，再用稀硫酸溶液（3.2.4）调节pH至2-3之间后进行固相萃取操作。C18SPE小柱预先用3mL乙腈淋洗3次，再用3mL纯水淋洗2次进行活化，然后将调节完p

6、H值的水相提取液加入小柱，控制流速至每秒1-2滴，待全部溶液通过SPE小柱后，以3mL超纯水淋洗2次，弃去流出液，最终以3mL乙腈（3.1.1）洗脱2次。乙腈洗脱液50℃氮吹近干，用0.5mL甲醇（3.1.2）溶解后过微孔滤膜（0.22μm，有机相），过滤液置于进样小瓶内衬管中供LC-MS/MS测定。5.2仪器参考条件5.2.1色谱条件a）色谱柱：C18柱，1.8μm，100mm×2.1mm（内径），或性能相当者；b）流动相：A为0.1%甲酸水溶液（3.2.1），B为0.1%甲酸乙腈溶液（3.2.2）

7、，洗脱梯度见表1；c）流速：0.3mL/min；d）柱温：40℃；e）进样量：2μL。表1洗脱梯度时间（min）流动相A（%）流动相B（%）085151851521090510905.18515685155.2.2质谱条件a）电离方式：电喷雾正离子模式；b）检测方式：多反应监测（MRM）；c）雾化气压力：30psi；d）离子喷雾电压：4000V；e）干燥气温度：500℃；f）干燥气流速：8L/min；g）定性离子、定量离子、碎裂电压和碰撞能量见表2。表2辣椒素的定性离子、定量离子、去簇电压和碰撞能量中

8、文名称母离子（m/z）子离子（m/z）去簇电压（V）碰撞能量（eV）合成辣椒素294.1137.1*；170.112024/13天然辣椒素306.2137.1*；182.110025/15二氢辣椒素308.1137.1*；184.19019/15*指定量离子。5.3定性测定按照上述条件测定试样和混合标准工作液，如果试样中的质量色谱峰保留时间与混合标准工作液中的某种组分一致（变化范围在±2.5%之内）；且试样中定性离子的相对丰度与浓度相当混合标准工作液的定