非洲猪瘟病毒实验室检测方法研究进展.pdf

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1、技术非洲猪瘟病毒实验室检测方法研究进展■文/山东省滨州畜牧兽医研究院庄金秋梅建国谢金文李峰沈志强了间接ELISA方法检测ASFV抗体，摘 要非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的猪的一种急性、热性、高度接具有较好的敏感性和特异性。Pastor触性传染病，其临床症状与猪瘟极其相似。本病已在非洲、欧洲和美洲等几[2]等(1990)分别以ASFV主要结构蛋白十个国家暴发。虽然我国尚未发生，但防控其传入的形势也非常严峻。本文VP73和病毒感染的细胞培养物中高特综述了非洲猪瘟病毒最新实验室检测方法研究进展，以期为我国开展非洲猪异胞质可溶性抗原(CS-P)建立了两种瘟的监测及综合防

2、控提供技术参考。间接ELISA方法，两种方法特异性均关键词非洲猪瘟；非洲猪瘟病毒；检测；研究进展较高，但是CS-P抗原比VP73抗原至少能提前2d检测出ASFV抗体。Vidal洲猪瘟(AfricanSwineFever，预防疫苗和治疗药物，防止疫情扩大[3]非等(1997)用VP73单抗建立的固相ASF)是由非洲猪瘟病毒科非洲的唯一有效措施就是扑杀。因此事先ELISA，能够检测到浓度为0.5μg/mL猪瘟病毒(AfricanSwineFeverVirus，建立简便、快速、准确的ASFV检测2的VP73抗原和2.3×10pfu/mL的全病ASFV)感染引起的家猪和

3、野猪的一种方法显得十分必要。本文综述了ASFV[4]毒颗粒。Hutchings等(2006)比较了用急性、热性、高度接触性传染病。临最新实验室检测方法研究进展，以期全病毒多抗血清和针对VP73蛋白的单床症状与猪瘟极其相似，以高热、皮为我国开展ASF的监测提供技术参考。抗进行间接夹心ELISA检测ASFV，显肤发绀、内脏器官严重出血、呼吸障1 血清学检测方法示多抗血清的敏感性高于单抗。Perez碍和神经症状为主要特征。本病传播[5]等(2006)以昆虫细胞表达的P30重快、致死率高，对养猪业危害巨大，1.1酶联免疫吸附试验(ELISA)组蛋白为包被抗原，建立了检测

4、ASFV是我国一类动物疫病和世界动物卫ELISA应用于血清抗体的检测，抗体的间接ELISA方法，敏感性高，生组织(OIE)规定的必须报告的动物具有操作方便、特异性较好、灵敏可用于ASFV特异性抗体的早期检疫病，受到世界各国的高度重视。本度高的特点，适用于大批量样品的检[6]测。Gallardo等(2009)利用重组蛋病是唯一以节肢动物作为传播媒介的测，OIE将ELISA作为诊断ASF的首白pK205R、pB602L、p104R和P54DNA病毒。迄今为止，ASF已在非洲、选血清学方法。ASFV含有约150种建立的ELISA检测方法具有较高的敏欧洲和美洲等几十个国

5、家暴发。虽然蛋白，目前国内外常用作检测抗原的[7]感性和特异性。蒋正军等(2000)以我国尚未发生，但防控ASF传入的形蛋白有VP73、VP72、P54、P32、[1]杆状病毒表达的ASFVVP72蛋白为抗势非常严峻。目前，本病尚无有效的P30等。Wardly等(1979)首次建立原，研究和组装了间接ELISA抗体检基金项目：山东省重点研发计划项目(2015GSF121027)；山东省现代农业产业技术测试剂盒，具有反应体系小、快速、体系生猪产业创新团队项目(SDAIT-08-17)。32规模养猪MODERNSWINEINDUSTRY特异等优点，且比Dot-ELI

6、SA方法更1.2胶体金免疫层析(GICA)试纸条胞进行检测，3d后观察到噬斑。可对[8][18]加敏感。仇华磊(2006)采用大肠杆张鑫宇等(2014)用原核表达的ASFV进行抗原定量分析。此方法快速、菌表达的GST-VP72融合蛋白为包被ASFVP54重组蛋白制备了ASFV抗体特异，不用借助其他仪器，肉眼便可[9][23]抗原，建立了间接ELISA。朱红(2007)快速检测胶体金试纸条，通过对ASFV观察结果。Pastor等(1992)用细胞成功获得5株分泌抗ASFVVP72蛋不同感染时期141份猪血清样品进行质可溶性抗原CS-P，建立了斑点免疫白单克隆抗体的

7、细胞株，也建立了间比对检测，显示该试纸条在感染早期(DIA)检测方法，敏感性与OIE推荐的[10][24]接ELISA方法。李秋霞(2010)以大的符合率高于OIE推荐的ELISA检测ELISA方法相当。Marco等(2007)[19]肠杆菌表达的ASFVpET32a-VP73L方法。刘波(2014)也运用原核表达建立了免疫组化法，用来检测急性感重组蛋白作为包被原，也建立了间接系统和胶体金免疫层析技术，对ASFV染ASFV猪的扁桃体组织病理学变化，[11]ELISA方法。曾少灵等(2013)利用快速检测试纸条的技术进行了研究。通过检测发现，感染ASFV猪有出血、

8、[20]杆状病毒表达载体