蛋白质的表达与纯化.ppt

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1、呼吸道合胞体融合糖蛋白的分离纯化Purificationofhumanrespiratorysyncytialvirusfusionglycoprotein主要内容概述12结果讨论34实验方法结论概述人呼吸道合胞病毒（RSV）感染是婴儿严重的呼吸系统疾病最常见的原因，它会感染近100%小于两岁的婴儿，是引起毛细支气管炎的主要原因。也会引起较大的儿童的较大发病率和成年人潜在的风险因素。因此，通过开发RSV疫苗的方法预防疾病。实验方法RSV为只有11的病毒蛋白的病毒粒子，包括RSVF[19]，所以比较受感染的

2、细胞，会更容易从呼吸道合胞病毒颗粒纯化F。我们为此设计一种在Hep-2细胞增殖的颗粒RSV，结合蔗糖的两步色谱梯度离心法净化F。本研究的目的是通过定量分析得到的数据，测试我们的方法的可行性。实验流程病毒感染Hep-2细胞病毒的收集和纯化RSVF纯化分离纯化用离子交换层析、凝胶过滤色谱法、SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹。蛋白质浓度的测定用BCA蛋白测定试剂盒测定。结果讨论离子交换层析的洗脱曲线第一个峰是NaCl洗脱的含F目标蛋白（140kDa）凝胶色谱进一步纯化RSVF蛋白的凝胶过滤色谱曲线。阴离子交

3、换的色谱峰最大部分被收集，通过凝胶过滤色谱法进一步纯化。得到两个峰，140kDa的F蛋白质在峰1被发现。SDS-PAGESDS-PAGE凝胶用考马斯亮蓝染色。1条带表明分子重标记。其他条带中的样品在RSVF的每一步蛋白纯化：2条带，纯化的病毒颗粒的上清液；3条带，分离的病毒粒子；4条带，在阴离子交换色谱法洗脱峰1；5条带，凝胶过滤色谱洗脱峰1。免疫印迹显示RSVF蛋白的纯化条带1显示标记。其他条带包含以下的样本：2条带，纯化的病毒粒子；3条带，呼吸道合胞病毒颗粒的上清液分离。4条带，从阴离子交换色谱洗脱峰

4、1；5条带，从凝胶过滤层析洗脱峰1。免疫印迹分析免疫印迹显示18F12单克隆抗体处理凝胶过滤洗脱液（a，2条带）和单克隆抗体F8（b，2条带）。在每个板1条带显示分子量标记。2条带检测抗体（图a）和2条带（图b）分别时单克隆抗体18F12和单克隆抗体F8。结论我们已经开发出一种采用结合两步色谱过程的蔗糖密度梯度离心从RSV颗粒纯化RSVF的新的有效方法，纯化的F恢复作为一个140kDa的功能性的二聚体，与原RSVF54%保存方法。在净化呼吸道合胞病毒包膜糖蛋白，这种方法是有用的，因此，用这种方法开发RSV

5、疫苗。谢谢