胰蛋白酶的活力的测定1.ppt

《胰蛋白酶的活力的测定1.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、胰蛋白酶的活力的测定一、酶的化学本质概念是一类生物催化剂。化学本质绝大多数酶是蛋白质，某些RNA或DNA也具有催化活性。二、酶的化学组成蛋白质的酶单纯蛋白质的酶全酶酶蛋白辅助因子辅助因子辅基/辅酶小分子有机化合物、金属离子，直接参加反应。直接对电子、原子或某些化学集团起传递作用。酶蛋白决定反应特异性（专一性）。一种辅助因子可与多种酶蛋白结合；一种酶蛋白只能与一种辅助因子结合。三、酶的活性中心必需基团酶分子中与催化作用直接相关、不可缺少的化学基团。活性中心酶分子中必需基团相对集中，构成一定空间结构区域，与催化作用直接相关。活

2、性中心结合部位（底物）催化部位（底物的键在此处被打断或形成新的键）四、酶的命名与分类习惯命名法按催化反应类型分类脱氢酶、脱羧酶、连接酶、聚合酶等。按组织来源及性质分类胃蛋白酶/胰蛋白酶，酸性/碱性磷酸酶等。国际系统命名法分类催化的反应性质不同分为六大类酶原与酶原激活无活性的酶前身物称酶原。由无活性酶原转变为有活性酶的过程称酶原激活。同工酶分子结构不同、理化性质也不同，但催化同一化学反应的一组酶，如乳酸脱氢酶（LDH）。别位酶多亚基组成，其中有催化亚基、有调节亚基，小分子化合物结合调节亚基后分子构象改变，引起催化活性改变。五

3、、酶的活力测定酶活力（enzymeactivity），是指酶催化一定化学反应的能力。酶活力单位（国际单位）标准状态下，每分钟使一微克分子作用物发生转变的酶量。人们普遍采用是习惯用法，如a-淀粉酶，可用每小时催化1克可溶性淀粉所需要的酶量来表示。胰蛋白酶活力单位的定义规定为：以BAEE为底物反应液pH8.0，25℃，反应体积3.0ml，光径1厘米的条件下，测定A253，每分钟使A253增加0.001，反应液中所加入的酶量为一BAEE单位。初速度研究酶反应的动力学以酶促反应的初速度为准酶活力与酶反应速度时间以N-苯甲酰-L

4、—精氨酸乙酯为底物，用紫外吸收法进行测定的原理是：N－苯甲酰－L—精氨酸乙酯英文缩写为BAEE）在波长253nm下的紫外吸收远远弱于苯甲酰L—精氨酸（英文缩写为BA）。在胰蛋白酶的催化下，随着酯键的水解，苯甲酰L—精氨酸逐渐增多，反应体系的紫外吸收宜随之相应增加。操作方法取2个光程为1厘米的石英比色杯，分别加入25℃预热过的2.8ml底物溶液。向一只比色杯中加入0.2ml0.001mol/LHCl，作为空白，校正仪器的253nm处光吸收零点。再在另一比色杯中加入0.2ml待测酶液，立即混匀并记时，每半分钟读数一次，共读3~

5、4分钟。绘制酶促反应动力学曲线，从曲线上求出反应起始点吸光度随时间的变化率（即初速度）A253/min。样品胰蛋白酶BAEE活性单位＝每分钟A253nm增加值0.001