检体样制备建议事项.doc

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1、檢體樣本製備建議事項一、前言:一個完美的分析結果需要各個環節的相互配合，除了儀器本身的性能外，樣品的處理也扮演著重要的角色•分析反應的順利進行需依賴一組理想的模板DNA以及設計良好的Primer相互搭配，以下為針對這些議題所提供的一些建議事項・二、製備模板DNA之注意事項：目前萃取模板DNA可使用許多種方式進行，除了傳統的PhenolChroloform方式外，市場上也有許多的試劑組可供更方便快速的選擇•不論是使用哪種方式進行模板DNA的萃取，所需要注意的就是產物的純度是能夠維持在一定的程度，尤其是產物內是否有鹽類、蛋白質、RNA或是一些Deterg

2、ent的殘留•2.1殘留鹽類的影響:由於毛細管電泳系統是使用"electrokinetics的方式進行上樣的動作，其原理是提供電流將帶測試之樣品吸入毛細管中，如果樣品內殘留鹽類，會造成鹽類與待測試反應產物相競爭，造成反應結果中之訊號降低，因此要排除鹽類之殘留•2.2殘留蛋白質的影響:由於毛細管電泳系統使用之毛細管管徑非常的細小，如果樣品內殘留蛋白質，會造成毛細管表面吸附甚至堵塞毛細管，此現象會直接影響到毛細管之泳動速度，竟而造成反應訊號之解析度降低而干擾分析之進行，因此要排除蛋白質之殘留•殘留RNA的影!由於毛細管電泳系統是使用Electrokinet

3、ics的方式進行上樣的動作，如果樣品內殘留RNA,會造成RNA與待測試反應產物相競爭，造成反應結果中之訊號降低，因此要排除RNA之殘留•2.4殘留Detergent的影響：在檢體製備的過程中，經常會使用到如TritonX-100或是SDS等detergent,這些物質會伴隨著DNA進入毛細管內，對於毛細管而言是一種傷害，會造成毛細管之壽命降低•三、製備模板DNA之建議事項：建議各位在萃取完DNA後，可以使用分光光度儀進行OD260280之測定，這項測定除了可以測試樣品之quility外，同時可以進行樣品之定量測定・一般建議之比值需介於1.6-1.8之

4、範圍為最理想・