课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (3).pptx

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1、课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数阅读P21课题背景细菌能分解尿素的原因：土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶CO(NH2)2+H20脲酶+CO22NH3常见的分解尿素的微生物芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。1.从土壤中分离出能够分解尿素的细菌2.统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌课题目的研究思路（一）筛选菌株你会去哪里寻找这种细菌？资料：DNA多聚酶链式反应（PCR)是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。水生耐热细菌TaqTaq聚

2、合酶（TaqDNA聚合酶）美国黄石国家公园热泉分离出2.实验室中微生物筛选的原理1.目的菌株筛选的依据：根据目的菌株对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。思考：根据以上原理怎么从土壤中筛选出能分解尿素的细菌？15.0g琼脂1.0g尿素CO(NH2)10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO4土壤中分解尿素的细菌的分离所需培养基：①从物理性质看此培养基属于哪类？固体培养基②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？碳源：葡萄糖氮源：尿素选

3、择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。（1）将土壤中的固氮菌分离出来（2）将土壤中自养微生物分离出来举一反三（3）筛选出抗青霉素的微生物（4）筛选出耐高浓度食盐的微生物……不含氮源的培养基不含碳源的培养基如：真菌如：金黄色葡萄球菌1、利用尿素作为唯一氮源的培养基分离出的微生物①只是一种细菌吗？②都是能分解尿素的微生物吗？①不是，有多种。②不一定2、请你提供一种方法，判断分解尿素的细菌确实能将尿素分解成氨。酚红指示剂（二）统计菌落数目平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法10110210310410510

4、6⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。每克样品中的菌落数＝(C÷V)×MC：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数V：涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)M：稀释倍数稀释涂布平板法设置重复组第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。这个实例启示我们，在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实

5、验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。设置重复组的重要性注意：统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法。每克样品中的菌株数＝（C÷V）×MC：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数V：涂布平板时所用的稀释液的体积（ml)M：稀释倍数注意事项①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。②为使结果接近真实值可将同一稀释度

6、加到三个或三个以上的平板中，经涂布，培养计算出菌落平均数。③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。显微镜直接计数：利用血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察；缺点菌落计数法显微镜直接计数法稀释涂布平板法比浊法膜过滤法除上述两种常用的计数方法外，还有膜过滤法、比浊法。膜过滤法是当样品中菌数很低时，可以将一定体积的湖水、海水或饮用水等样品通过膜过滤器。然后将滤膜干燥、染色，并经处理使膜透明，再在显微镜下计算膜上(或一定面积中)的细菌数；比浊法原理是在一

7、定范围内，菌的悬液中细胞浓度与混浊度成正比，即与光密度成正比，菌越多，光密度越大。因此可以借助于分光光度计，在一定波长下，测定菌悬液的光密度，以光密度表示菌量。实验测量时一定要控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内，否则不准确。微生物计数法，发展迅速，现有多种多样的快速、简易、自动化的仪器和装置等方法。例题：统计菌落数目的方法有（）A.①②③⑥B.③④⑤⑥C.②③④⑥D.①③④⑥D①涂布平板法②重量法③直接计数法④比浊法⑤生理指标法⑥膜过滤法小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验方

8、案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养