课题3 分解纤维素的微生物的分离.pptx

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1、课题3分解纤维素的微生物的分离1、纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物,是地球上含量最丰富的多糖。2、可被土壤某些微生物分解利用。课题背景草食性动物是怎样消化食物中纤维素的?胃中生活着大量分解纤维素的微生物,能产生纤维素酶,将纤维素分解成葡萄糖。而人没有分解纤维素的能力。葡萄糖苷酶纤维素酶是一种__________,它包括__________、______和_____________,具有催化分解纤维素的作用。复合酶C1酶CX酶纤维素纤维二糖葡萄糖C1酶CX酶葡萄糖苷酶棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物,纤维素的分解需要在纤维素酶的催化作用下完成,请完成下

2、列过程:基础知识(一)纤维素与纤维素酶①取二支20mL的试管实验:纤维素酶分解纤维素的实验②各加入一张滤纸条③各加入pH4.8,物质量为0.1mol/L的醋酸-醋酸钠缓冲液11ml和10ml甲乙④在乙试管中加入1mL纤维素酶⑤两支试管固定在锥形瓶中,放在140r/min的摇床上振荡1h⑥结果:乙试管的滤纸条消失讨论:乙试管的滤纸条为什么会消失?甲试管的作用是什么?在一支试管中添加纤维素酶,另一支试管不添加纤维素酶;尽管醋酸-醋酸钠缓冲液用量不同,但都能维持相同的pH。〖思考1〗实验分析:P27的小实验是如何构成对照的?下列生物能分解纤维素的是()①人②兔③牛④蘑菇⑤纤维

3、杆菌A.①②③④⑤B.②③⑤C.②③④⑤D.③⑤C方法-----------选择培养基以纤维素为唯一碳源-----------刚果红染色法红色复合物刚果红纤维素红色消失,出现透明圈(二)纤维素分解菌的筛选1.下列关于纤维素酶的说法,错误的是A.纤维素酶是一种复合酶,至少包括三种B.纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖C.纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁D.葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖2.利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌,下列说法错误的是A.刚果红能与纤维素形成红色复合物B.刚果红能与纤维二糖形成红色复合物C.刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物D.若培养基上产生了透明圈,则说

4、明已筛选出了纤维素分解菌实验设计土壤取样选择培养*梯度稀释将样品涂布到鉴别培养基挑选菌落什么样的环境取样?①培养的目的?②选择培养基的特点?挑选什么样的菌落?①鉴别培养基的特点?②如何鉴别?思考:本实验的流程与课题2中的实验流程有哪些异同?本实验流程与课题2的流程的区别如下。课题2是将土样制成的菌悬液直接涂布在以尿素为唯一氮源的选择性培养基上,直接分离得到菌落。本课题通过选择培养,使纤维素分解菌得到增殖后,再将菌液涂布在鉴别培养基上。其他步骤基本一致。①分布环境1、土壤取样:富含纤维素的环境中操作步骤实例:树林中多年落叶形成的腐殖土,多年积累的枯枝败叶等。②讨论:如果找

5、不到合适的环境,可以将滤纸埋在土壤中,将滤纸埋在土壤中有什么作用?你认为滤纸应该埋在土壤中多深?将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对集中,实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般应将滤纸埋于深约10cm左右的土壤中。2、选择培养增加纤维素分解菌的浓度,以确保能够从样品中分离所需要的微生物。①目的:②制备选择培养基:③操作:将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中,将锥形瓶固定在摇床上,在一定温度下振荡培养1~2天,直至培养液变浑浊。也可重复选择培养。培养基成分分析培养基组成纤维素粉5gNaNO31gKCl0.5gNa2HPO4·7H2O1.2gKH2PO40.

6、9gMgSO4·7H2O0.5g酵母膏0.5g水解酪素0.5g溶解后,蒸馏水定容至1000mL说明:分析“纤维素分解菌的选择培养基配方”可知,该配方中的酵母膏也能够提供少量的碳源,因此其他微生物也能在该培养基中生长繁殖。只不过,由于酵母膏的含量极少,因此,只有以纤维素为碳源的微生物才能大量繁殖。自变量为培养基的种类,即普通培养基和选择培养基。可用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照,或者将纤维素改为葡萄糖。A、给出的配方是液体培养基还是固体培养基?为什么?是液体培养基,原因是配方中无凝固剂(琼脂)B、这个培养基对微生物是否具有选择作用?如果具有,是如何进行选择的?有选择作用,本配

7、方中纤维素粉作为主要碳源,只有能分解纤维素的微生物可以大量繁殖。C、你能否设计一个对照实验,说明选择培养基的作用〖旁栏思考题〗为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物?在选择培养的条件下,可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖,而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制,因此可以起到“浓缩”的作用。比较项目分解尿素的细菌纤维素分解菌选择培养基原理培养基类型目的鉴定培养基原理现象方法将细菌涂布在只有尿素做氮源的选择培养基上将细菌培养在只有纤维素粉做碳源的选择培养基上固体培养基液体培养基筛选菌株选择培养按照课题1的稀释操作方法,将

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