课题3　分解纤维素的微生物的分离 (2).pptx

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1、纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质，植物每年产生的纤维素超过70亿吨；分布在植物的根、茎、叶中。2.3分解纤维素的微生物的分离㈠纤维素与纤维素酶纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质。棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。纤维二糖C1酶、Cx酶葡萄糖苷酶葡萄糖纤维素①取二支20mL的试管纤维素酶分解纤维素的实验②各加入一张滤纸条③各加入pH4.8，物质量为0.1mol/L的醋酸－醋酸钠缓冲液11ml和10m

2、l甲乙④在乙试管中加入1mL纤维素酶⑤两支试管固定在锥形瓶中，放在140r/min的摇床上振荡1h⑥结果：乙试管的滤纸条消失讨论：乙试管的滤纸条为什么会消失？甲试管的作用是什么？A、人体能不能对纤维素消化吸收？为什么？不能，因为人体不能合成纤维素酶。思考：B、食物中的纤维素有什么作用？食物中的膳食纤维可刺激胃肠蠕动和分泌消化液，有助于食物的消化和排泄。C、食草动物本身能直接消化吸收纤维素吗？不能，食草动物依赖其消化道中的共生微生物将纤维素分解，从而得以吸收和利用。二、纤维素分解菌的筛选2、筛选原理：1、筛选方法：刚果红染色法刚果红（CR）是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成

3、红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应3、筛选过程：通过产生的透明圈来筛选纤维素分解菌加入刚果红红色复合物红色复合物无法形成出现以纤维素分解菌为中心的透明圈纤维素被分解纤维素图2-13四种纤维素分解菌在刚果红培养基上形成的透明圈土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落纤维素分解菌大多分布在富含纤维素的环境中。采集土样时，应选择富含纤维素的环境。如树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等等。也可将滤纸埋在土壤中一个月左右，在从已腐烂的滤纸上筛选纤维素分解菌。1.土壤取样2、纤维素分解菌选择培养基属于______（固体、

4、液体）培养基，原因是__________________2.选择培养阅读资料二“选择培养基”，回答以下几个问题：液体没有添加凝固剂（琼脂）成分1、实验流程中“选择培养”的目的是什么？其目的是增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物。3、该培养基对微生物______（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是__________________________________________以纤维素粉为唯一碳源，能分解纤维素的微生物可以大量繁殖具有4、设计一个对照实验，说明选择培养基的作用？用牛肉膏蛋白胨培养基与其对照选择培养：称取土样20g，在无菌条件下加入

5、装有30mL选择培养基的锥形瓶中。将锥形瓶固定摇床上，在30℃下振荡培养1～2d，至培养基变混浊。吸取一定的培养液（约5mL），转移至另一瓶新鲜的选择培养基中，以同样的方法培养到培养液变浑浊。3.梯度稀释按照课题1的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释101～106倍。1011021031041051064.将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上制备鉴别培养基培养基组成提供的主要营养物质CMC-Na(水溶性羧甲基纤维素钠)5~10g碳源酵母膏1g碳源、氮源、生长因子KH2PO40.25g无机盐土豆汁100mL碳源、生长因子琼脂15g凝固剂上述物质溶解后，加蒸馏水定容至100

6、0mL氢元素、氧元素2.涂布平板：将稀释度为104～106的菌悬液各取0.1mL涂布在培养基上，30℃倒置培养3、刚果红染色法分离方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应方法二：在倒平板时就加入刚果红两种常用刚果红染色法的比较项目先培养微生物再加入刚果红在倒平板时加入刚果红过程优点缺点显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌产生的操作简便，不存在菌落混杂问题操作繁琐。刚果红会使菌落之间发生混杂1.产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈2.有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。配制CR溶液（质量浓度为10mg/mL）→灭菌→按照1mLCR溶液/200mL培养基的比例混匀→倒平板→培养→

7、产生透明圈培养长出菌落→覆盖CR溶液（质量浓度为1mg/mL）倒出CR溶液→加入Nacl溶液(物质的量浓度为1mol/L)倒掉Nacl溶液→产生透明圈10~15min15min为了确定分离得到的是纤维素分解菌，还需要进行_______________实验，纤维素酶的发酵方法有______发酵和______发酵。纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生的________含量进行定量测定。发酵产纤维素酶液体固体葡萄糖分解纤维素的微生物的分离纤维素酶种