细胞培养总结范文.doc

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1、细胞培养总结范文　　细胞培养学习总结--贴壁细胞培养技术　　一、细胞培养一般流程㈠、复苏　　1、实验前做好相关准备工作（水浴锅37℃；超净工作台的无菌环境；准备好实验相关仪器和试剂）。　　2、把冻存管从液氮灌中取出来，立即投入37℃（≦40℃）水浴锅中，晃动冻存管，使液体在1min以内全部融解（关键步骤），用酒精棉擦拭其外壁，放到超净工作台里。　　3、把上述细胞悬液吸到15ml的离心管中，加入适量培养基，(用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来，转移时不要直接倒，以防污染)，1000转离心1-3min（可根据所培养细胞调

2、整）。　　4、吸弃上清液，加适量培养基把细胞吹散成细胞悬液，转移到培养瓶中，加适量完全培养基（常为覆盖培养瓶底面即可）。　　5、标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后再换培养基。　　6、注意观察细胞生长状态，及时换液或传代。　　㈡、换液　　1、实验前做好相关准备工作（超净工作台的无菌环境；准备好实验相关仪器和试剂）。　　2、取出培养瓶，用75%酒精消毒后放入超净实验台。　　3、吸弃旧培养液，用适量（如2ml）PBS（磷酸盐缓冲液）清洗细胞（可根据细胞状态洗1-2遍，一般从没有细胞的那一侧倒掉）。　　4

3、、加入适量新鲜完全培养基，放回培养箱继续培养。　　㈢、传代　　1、实验前做好相关准备工作（超净工作台的无菌环境；准备好实验相关仪器和试剂）。　　2、取出培养瓶，用75%酒精消毒后放入超净实验台。　　3、吸弃旧培养液，用适量（如2ml）PBS（磷酸盐缓冲液）清洗细胞（可根据细胞状态洗1-2遍）。　　（前面步骤同换液）　　4、加适当的胰蛋白酶（0.05%）(能覆盖细胞就行)，放入细胞培养箱中消化1-2min（根据不同类型细胞而定）。　　5、细胞都变圆后加如入等体积的完全培养基终止消化。　　6、用滴管缓慢吹打细胞，使细胞都悬浮起来成细胞

4、悬液，吸到15ml的离心管中，1000转离心1-3min。　　7、倒掉上清液，加1-2ml完全培养基，将细胞吹散成单个细胞。　　8、根据细胞浓度把细胞传到几个培养瓶中，加入适量完全培养基（一般癌细胞一个培养瓶分2个），放回培养箱中继续培养。　　㈣、冻存　　1、实验前做好相关准备工作（预先配置好冻存液放入4℃保存，常为10%DMSO+90%血清，配制过程中加入DMSO要缓慢，且边滴边摇；超净工作台的无菌环境；准备好实验相关仪器和试剂）。　　2、取出培养瓶，用75%酒精消毒后放入超净实验台。　　3、吸弃旧培养液，用适量（如2ml）PB

5、S（磷酸盐缓冲液）清洗细胞（可根据细胞状态洗1-2遍）。　　4、加适当的胰蛋白酶（0.05%）(能覆盖细胞就行)，放入细胞培养箱中消化1-2min（根据不同类型细胞而定）。　　5、细胞都变圆后加入等体积的完全培养基终止消化。　　6、用滴管缓慢吹打细胞，把细胞都悬浮起来成细胞悬液，吸到15ml的离心管中，1000转离心1-3min。　　（同细胞传代中步骤）　　7、倒掉上清液，加入预制的冻存液制成细胞悬液，分装到灭菌的冻存管中，（注意不要加满，预留其结冰后的空间，一般1.8ml的冻存管加入≦1.5ml的细胞悬液）。　　8、写明细胞种类

6、、冻存日期。　　放入4℃冰箱30min，-20℃冰箱30min，-80℃冰箱过夜，最后放入液氮罐中保存。　　一、细胞培养注意事项注意无菌操作，以防细胞污染，定期检查培养箱、超净台，按时观察细胞状态，实验过程中注意保护自身安全。　　㈠、注意无菌操作　　1、实验进行前，超净工作台以紫外灯照射30-60min灭菌，并开启操作台风扇运转30min后，才开始实验操作。　　2、实验进行前，实验人员应穿戴好实验服，口罩，手套。　　3、所有拿进实验台的物品都应用75%酒精消毒。　　4、在酒精灯10cm内进行操作，开盖或封盖前应用酒精灯灼烧灭菌，但

7、注意对有滤膜的培养瓶不应灼烧，以免细胞污染。　　5、每次尽量只处理一个细胞株，以免发生细胞间污染。　　6、实验结束后，处理好废液，用75%酒精擦净台面，开启紫外，照射5min以上。　　㈡、定期检查项目　　1、培养箱之CO2浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。　　2、CO2钢瓶之CO2压力。　　3、超净工作台内之气流压力，定期更换紫外线灯管及HEPA（高效空气净化）过滤膜，预滤网(300小时/预滤网，3000小时/HEPA)。　　㈢、观察细胞状态　　1、正常状态下，细胞贴壁生长，当培养液颜色变淡时，应换液。　

8、　对于培养基中添加酚红指示剂的，若紫色变深，则应检查CO2供应，若颜色变黄，则可能是换液或传代频率太低。　　2、当培养瓶中细胞覆盖率达80%以上时，应传代。　　3、若发现很浑浊，且有许多漂浮死细胞时，可能细胞被污染，应丢弃被污染细胞并对培养箱进行灭