药品微生物限度检查方法验证试验.doc

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1、吉林九鑫药业有限公司检验原始记录药品微生物限度检查方法验证试验1、检品名称：更年宁检品批号：201110012、验证依据：《中国药典2010年版》微生物限度检查方法验证试验3、仪器：BP211D塞多利斯电子天平SPX－2503型生化培养箱SKP－01电热恒温培养箱YJA－电动匀浆仪4、培养基：营养琼脂培养基批号：081217玫瑰红钠琼脂培养基批号0902022：营养肉汤培养基批号：20110211胆盐乳糖增菌液批号：20110612乳糖胆盐发酵培养基批号：0901052MUG培养基批号：20110302甘露

2、醇氯化钠琼脂培养基批号：0930023麦康凯琼脂培养基批号：2010pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液批号：20110212改良马丁琼脂培养基批号20100101生产单位：北京三药科技开发公司靛基质试液0.9%氯化钠溶液5、细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证5.1验证用菌种：大肠埃希菌枯草芽孢杆菌金黄色葡萄球菌白色念球菌黑曲霉菌来源：巿药检所5．2菌液制备：5．2.1取经35℃培养18～24小时的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌与枯草芽孢杆菌肉汤液体培养物2～3白金耳加入9ml0.9％氯化钠溶液中，10倍稀释至10-3～

3、10-7约为50～100cfu/ml,做活菌计数用。5、2．2取经25℃培养18～24小时的白色念珠菌液体培养物2～3白金耳加入9ml0.9％氯化钠溶液中，10倍稀释至10-3～10-7约为50～100cfu/ml,做活菌计数备用。5.2.3取经培养一周的黑曲霉斜面培养物，加0.9％氯化钠溶液3ml，洗下霉菌孢子，取0.1ml加入9ml0.9％氯化钠溶液中，10倍稀释至10-3～10-7约为50～100cfu/ml,做活菌计数备用。5.3操作方法：本品按照常规方法检验，细菌、霉菌、酵母菌、枯草芽孢杆菌、金黄

4、色葡萄球菌回收率均大于70％，所以细菌、霉菌及酵母菌数测定应采用常规法。5.3.1供试液制备：取本品10g置匀浆杯中，加入pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液100ml，以4000转/分开机2分，即为1：10的供试液。5.4回收率测定：5.4.1菌液组：分别取上述5种菌液1ml，注入平皿中，倾注培养基，待凝后，置规定温度培养24～72小时，观察结果并计数，结果见表1。5．4.2供试品对照组：取1：10供试液1ml注入平皿中，倾注培养基，待凝后，置规定温度培养24-72小时，观察结果并计数，结果见表1。5.4.

5、3试验组：取供试液1ml按供试品对照组同法操作，同时每个平皿加入50～100cfu相应试验菌1ml，立即倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24-72小时，观察结果并计数。结果见表1。5.4.4结果：表1微生物限度检查方法验证结果菌种大肠埃希菌枯草芽孢杆金黄色葡萄球菌白色念球菌黑曲霉菌代数344333444444444稀释级10-810-810-810-610-610-510-710-710-710-510-510-510-610-610-4实验次数123123123123123菌液数（cfu/ml）8

6、98082707377929087697171686461试验组（cfu/ml）777169596163878079585961575452供试品组（cfu/ml）000000000000000人工染菌回收率（%）86.588.884.184.383.681.894.688.990.884.085.985.983.884.485.2从表1结果可以看出：采用常规法大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的回收率试验均高于70%，所以细菌数测定可以采用常规法。6.控制菌检查方法的验证大6.2菌液制备：大肠埃希菌

7、、金黄色葡萄球菌，菌液稀释同上，用0.9%无菌氯化钠溶液制成含菌数10-100cfu/ml的菌液。6.3验证方法：6.3.1试验组：取规定供试液及10-100cfu试验菌加入增菌液中，依相应控制菌检查法进行检查。大肠菌群检查所加试验菌为大肠埃希菌。6.3.2供试品组：取1：10供试液10ml置增菌液中，依相应控制菌检查法进行检查。6.3.3阴性菌对照组：方法同试验组，验证大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌时，阴性对照菌采用金黄色葡萄球菌。6.3.4阴性对照：取10ml稀释剂，置增菌液中，依相应控制菌检查法进行检查

8、。加菌量BLMUG靛基质试液甘露醇高盐EMB革兰染色LacIMViC结果供试品组---未检出试验组89+++检出阴性对照菌组92---未检出阴性对照----未检出表3大膓菌群加菌量胆盐乳糖发酵管甘露醇高盐EBM胆盐乳糖发酵管结果供试品组-未检出试验组89+检出阴性对照菌组92--未检出阴性对照-未检出从表2、表3、表4结果可以看出在控制菌的验证中，阴性对照菌组未检出阴性对照菌（金黄色葡萄球菌）而试验组检出出大肠埃