与菌落结果有关的因素.doc

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1、菌落总数就是指在一定条件下(如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等)每克(每毫升)检样所生长出来的细菌菌落总数。按国家标准方法规定,即在需氧情况下,37℃培养48h,能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数,所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌,由于现有条件不能满足其生理需求,故难以繁殖生长。因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数,菌落总数并不能区分其中细菌的种类,所以有时被称为杂菌数,需氧菌数等。细菌菌落总数检测常见误差原因分析录入时间:2011-9-3014:18:25来源:维普资讯 细菌菌

2、落总数是微生态制剂样品检测必做的一项指标。菌落总数检测同其他检验一样,也存在检测误差。平板计数法是检测饲料中细菌总数、活酵母数、芽孢杆菌数及乳酸菌数的常用方法之一,因此,该值准确与否直接关系到微生物饲料添加剂类产品的质量好坏。微生物平板计数的通常方法为每个样品用3个稀释度,每个稀释度常做3个重复。但如何对平板菌落进行正确计数、3个稀释度以哪一个稀释度进行计数及微生物检测允许误差等问题,在饲料标准中并未有所规定,而这些问题与统计值的准确性密切相关。我们就实际检测芽孢杆菌工作中遇到一些菌落计数的问题,与大家进行探讨。1材料与

3、方法1.1试验材料1.1.1样品:随机抽取微生态饲料添加剂合生素样品3份。1.1.2培养基:营养琼脂。1.1.3仪器设备:磁力搅拌器,无菌培养皿,培养箱,振荡器。1.2试验方法1.2.1样品的振荡时间对菌数检测的影响选择1个样品,称取10g,放入无菌锥形瓶内,加入90mL无离子水,磁力搅拌分别为l0、20、30、40和60min。用1mL移液枪从中吸取1mL样品悬浊液加入到盛有9mL去离子水的试管中,用振荡器使样品充分均匀,以此类推,制成10-1~1O-7不同稀释度的样品溶液。平板涂布法检测菌含量:用移液枪从样品稀释液中

4、各吸取200uL,每个样品稀释液3个重复;将平板倒置于35-37℃培养箱中培养24h。1.2.2检测方法对菌数检测的影响各个样品称取l0g,放入无菌锥形瓶内,加入90mL无离子水,磁力搅拌分别为40min。并稀释成10-1~l0-7不同稀释度的样品溶液。倾注平板法检测菌含量:用移液枪从各个平行样品相应稀释液中各吸取1mL,每个样品稀释液3个重复,待培养基表面干燥后,将平板倒置于35-37℃培养箱中培养24h。平板涂布法检测菌含量:用移液枪从各个平行样品相应稀释液中各吸取200uL涂布平板,每个样品稀释液3个重复;将平板倒

5、置于35~37℃培养箱中培养24h。2结果2.1样品的振荡时间对菌数检测结果的影响采用细菌平板计数的方法,不同振荡时间对合生素中芽孢杆菌检出量的结果见表1。从表l中可见:不同振荡时间获得的细菌菌落数量有较大差别。总体而言,在一定时间内,随着振荡时间的延长检出有效菌含量增加,说明细菌从载体上解析需要一定的时间;当振荡时间为40min后产品中的菌含量基本稳定。采用适当振荡时间才能更精确的显示产品中有效菌的含量。表1震荡时间对有效菌含量结果的影响亿CFU/g震荡时间10min20min30min40min60min含菌量261

6、0.515142.2检测方法对菌数检测结果的影响表2检测方法对有效菌含量结果的影响亿CFU/g检测方法样品平行123倾注平板法检测有效菌含量16.113.015.3平板涂布法检测有效菌含量14.511.214.2采用不同的检测方法,对合生素中芽孢杆菌检出量的结果见表2。从表2可见:不同方法获得的细菌菌落数量有差别,倾注平板法相较平板涂布法检测的菌含量多,但基本在20%误差范围内。平板计数法操作相对简单、快捷且影响因素较少。倾注法培养基营养分布较均匀,对部分蔓延菌落能控制,但对操作人员熟练程度要求相对较高。3分析与讨论3.

7、1样品处理对结果的影响取样时对样品取样口和取样工具要消毒,防止样品交叉污染。3.2样品的均质处理对结果的影响固体样品要用均质器或玻璃珠等充分均质,也可在稀释液中添加相应溶解液(如吐温80和液体石蜡等)的稀释液,以保证样品的充分均质。测定芽孢杆菌活菌数时,不同振荡时间获得的细菌菌落数量有较大差别,因为细菌从载体上解析并均匀分散到溶液中需要一定的时间,待测样品应在振荡器上充分振荡,使得芽孢杆菌可以充分和均匀地分散到待测溶液中,避免因为菌体未完全释放而引起结果中细菌含量偏低的现象。3.3试验过程中操作方法的影响加样lmL时,用

8、1mL的吸管并且每做一个稀释度都要换1支吸管,否则稀释度间菌落计数误差会超过10%,说明存在操作误差。用吸管向平皿里加样,平皿开口要小,吸管要直立且加样结束后,让吸头接触皿底干燥处,保证加样的体积不少。若采取倾注平板法时,平皿加样后要及时倾注琼脂,其间隔一般不超过20min(最好在10min内)。以琼脂不烫手(约45

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