叶绿素检测作业指导书.doc

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1、叶绿素检测作业指导书　　叶绿素检测作业指导书1.试剂1.1碳酸镁悬浮液称取1.0g细粉末碳酸镁悬浮于100ml蒸馏水中。　　每次使用时，要充分摇匀。　　1.2丙酮溶液在900ml丙酮中加100ml蒸馏水。　　1.3盐酸溶液量取83ml盐酸溶于水中，冷却并稀释至1000ml。　　2.测定步骤2.1浓缩在一定量的试样中添加0.2ml碳酸镁悬浮液，充分搅匀后，用直径60mm的微孔滤膜吸滤。　　过滤器内无水分后，还要继续抽吸几分钟。　　如果要延时提取，可把载有浓缩样品的滤膜放在干燥器里冷冻避光贮存。　　2.2提取将载有浓缩样品的滤膜放入研钵中，加入3ml丙酮溶液至滤纸浸湿的程

2、度，把滤膜研碎，再少量地加90%的丙酮溶液，把滤膜完全研碎，然后用90%丙酮溶液将已磨碎的滤膜和丙酮溶液洗入带刻度的带塞离心管中，使离心管内提取液的总体积不超过6ml，盖上管塞，置于4℃的暗处浸泡24h。　　2.3离心将离心管放入离心机中，以4000r/min速度离心分离20min。　　将上清液移入标定过的10ml具塞刻度管中，加少量90%丙酮溶液于原提取液的离心管中，再次悬浮沉淀物并离心，合并上清液。　　此操作重复2~3次，直至沉淀不含色素为止，最后将上清液定容至10ml。　　2.4测定取上清液于10mm或50mm的比色池中，以90%丙酮溶液为对照溶液，读取波长75

3、0,663,645和630nm的吸光度。　　选择比色池的光程长度或稀释度，使其光密度OD663大于0.2小于1.0。　　3.结果表示从各波长的吸光度中减去波长750nm的吸光度，作为已校正过的吸光度D，按下式计算叶绿素的浓度Ca=（11.64D663-2.16D645+0.10D630）V1/(V2·L)Cb=(20.97D645-3.94D663-3.66D630)V1/(V2·L)Cc=（54.22D630-14.8D645-5.53D663）V1/(V2·L)式中:Ca——叶绿素a的浓度；Cb——叶绿素b的浓度；Cc——叶绿素c的浓度；V1——提取液的定容体积；

4、V2——过滤水样的体积；L——比色池的光程长度；D——已校正过的提取液吸光度。　　　　内容仅供参考