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时间:2020-03-17
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1、叶绿素检测作业指导书 叶绿素检测作业指导书1.试剂1.1碳酸镁悬浮液称取1.0g细粉末碳酸镁悬浮于100ml蒸馏水中。 每次使用时,要充分摇匀。 1.2丙酮溶液在900ml丙酮中加100ml蒸馏水。 1.3盐酸溶液量取83ml盐酸溶于水中,冷却并稀释至1000ml。 2.测定步骤2.1浓缩在一定量的试样中添加0.2ml碳酸镁悬浮液,充分搅匀后,用直径60mm的微孔滤膜吸滤。 过滤器内无水分后,还要继续抽吸几分钟。 如果要延时提取,可把载有浓缩样品的滤膜放在干燥器里冷冻避光贮存。 2.2提取将载有浓缩样品的滤膜放入研钵中,加入3ml丙酮溶液至滤纸浸湿的程
2、度,把滤膜研碎,再少量地加90%的丙酮溶液,把滤膜完全研碎,然后用90%丙酮溶液将已磨碎的滤膜和丙酮溶液洗入带刻度的带塞离心管中,使离心管内提取液的总体积不超过6ml,盖上管塞,置于4℃的暗处浸泡24h。 2.3离心将离心管放入离心机中,以4000r/min速度离心分离20min。 将上清液移入标定过的10ml具塞刻度管中,加少量90%丙酮溶液于原提取液的离心管中,再次悬浮沉淀物并离心,合并上清液。 此操作重复2~3次,直至沉淀不含色素为止,最后将上清液定容至10ml。 2.4测定取上清液于10mm或50mm的比色池中,以90%丙酮溶液为对照溶液,读取波长75
3、0,663,645和630nm的吸光度。 选择比色池的光程长度或稀释度,使其光密度OD663大于0.2小于1.0。 3.结果表示从各波长的吸光度中减去波长750nm的吸光度,作为已校正过的吸光度D,按下式计算叶绿素的浓度Ca=(11.64D663-2.16D645+0.10D630)V1/(V2·L)Cb=(20.97D645-3.94D663-3.66D630)V1/(V2·L)Cc=(54.22D630-14.8D645-5.53D663)V1/(V2·L)式中:Ca——叶绿素a的浓度;Cb——叶绿素b的浓度;Cc——叶绿素c的浓度;V1——提取液的定容体积;
4、V2——过滤水样的体积;L——比色池的光程长度;D——已校正过的提取液吸光度。 内容仅供参考
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