血红蛋白的提取和分离(完美修改).doc

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1、专题五课题3血红蛋白的提取和分离学习目标1、理解凝胶色谱法、电泳法的基本原理，了解缓冲液的组成及其作用；2、掌握血红蛋白的提取与分离的基本过程和方法。一．基础知识蛋白质的物化理性质：，由此提取和分离各种蛋白质。1．凝胶色谱法（分配色谱法）：（1）概念：根据被分离蛋白质的，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来分离蛋白质的有效方法。（2）原理：分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。（3）凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。（4）分离

2、过程：（图5－13b）混合物上柱→→分子流动快、分子流动慢→收集分子→收集分子（洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。）2.缓冲溶液（1）作用：能够抵制的对溶液的的影响，维持PH基本不变。（2）缓冲溶液的配制：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成（如H2CO3－NaHCO3；NaH2PO4/Na2HPO4等）。通常由种缓冲剂溶解于水中配制而成。3.凝胶电泳法：（1）原理：不同蛋白质的不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。（2）分离方法：、。

3、（3）分离过程：在一定pH下，使蛋白质基团带上正电或负电；加入带负电荷多的_______，形成“蛋白质－SDS复合物”，使蛋白质迁移速率仅___________________。二．实验设计1.蛋白质的提取和分离一般分为哪些基本步骤？、、、。2.选择实验材料（1）你认为鸟类血液和哺乳动物血液中，最好哪种血液来提取血红蛋白？为什么？_____________。___________________________________________________。（2）请阅读教材，认识哺乳动物血液组成及血红蛋白性质

4、。并思考回答下列问题：血液由和两部分组成。血细胞中细胞数量最多，细胞的含量最高的化合物是。该化合物是由和构成的，其中每个亚基中都含有一个能与O2和CO2结合的基团。3.样品处理：从红细胞中分离出血红蛋白的过程为：洗涤红细胞、释放血红蛋白、分离血红蛋白、透析。(1)红细胞的洗涤：①目的：去除②方法：离心思考：加入柠檬酸钠有何目的？5(2)血红蛋白的释放：加入_________________，红细胞破裂，释放血红蛋白。其中加入甲苯的目的是溶解细胞膜。(3)分离血红蛋白溶液：第1层（最上层）：层（无色透明）第2层（

5、中上层）：的沉淀层（色薄层固体）第3层（中下层）：的水溶液层（的液体）第4层（最下层）：其它杂质的沉淀层（色）(4)透析：4.凝胶色谱制作5.血红蛋白分离的完整过程：血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即样品的处理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即样品的粗分离；然后通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。三、巩固练习1.凝胶色谱法分离蛋白质的依据

6、是（）A.对其他分子的亲和力B.溶解度C.所带电荷多少D.相对分子质量的大小2.用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质（）A．路程较长，移动速度较慢B.路程较长，移动速度较快C．路程较短，移动速度较慢D.路程较短，移动速度较快3．能进入凝胶内部通道的蛋白质是指A．相对分子质量大的B．吸附性高的C．相对分子质量小的D．溶解度低的4．凝胶色谱法中移动得快的是A．相对分子质量大的B．溶解度高的C．相对分子质量小的D．溶解度低的5.凝胶色谱法是根据（）分离蛋白质的有效方法。A．分子的大小B．相对分子质量的大小C．带

7、电荷的多少D．溶解度6．利用凝胶色谱法分离蛋白质，最先洗脱的蛋白质特点是A．相对分子质量大的B．溶解度高的C．相对分子质量小的D．所带电荷多的7.蛋白质提取和分离分为哪几步（）A.样品处理、凝胶色谱操作、SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳B.样品处理、凝胶色谱操作、纯化C.样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定D.样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定8.选用红细胞作为分离蛋白质的实验材料，有何好处（）A.血红蛋白是有色蛋白B.红细胞无细胞核C.红细胞蛋白质含量高D.红细胞DNA含量高9.样品的加入和洗脱的叙述正确的是（）A.先加

8、入1ml透析后的样品B.加样前要使缓冲液缓慢下降全部流出C.如果红色带均匀一致的移动，说明色谱柱制作成功D.洗脱时可以用缓冲液也可以用清水10.凝胶色谱法中所用的凝胶化学本质大多是A.糖类化合物B.脂质C.蛋白质D.核酸11．相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个512．缓冲液的作用是在一定范围内，抵制外界的影响来维持下列哪一项状态基本不变的A．温度B．pHC．渗