DB22∕T 396.9-2017 保健用品毒理学评价程序与检验方法 第9部分：哺乳动物培养细胞染色体畸变试验.pdf

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1、ICS11.020C05备案号：58328-2018DB22吉林省地方标准本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T396.9—2017代替DB22/T396-2014保健用品毒理学评价程序与检验方法第9部分：哺乳动物培养细胞染色体畸变试本标准仅供内部使用不得翻印验ToxicologicalevaluationproceduresandtestmethodsforhealthcareproductsPart9:Chromosomeaberrationtestofculturedmammaliancells2017-11-1

2、0发布2017-12-30实施吉林省质量技术监督局发布本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T396.9—2017本标准仅供内部使用不得翻印前言DB22/T396《保健用品毒理学评价程序与检验方法》拟分为如下部分：——第1部分：评价程序；——第2部分：急性经皮毒性试验；——第3部分：长期经皮毒性试验；——第4部分：皮肤刺激性试验；——第5部分：皮肤变态反应试验；——第6部分：细菌回复突变试验；——第7部分：啮齿动物微核试验；——第8部分：小鼠精子畸形试验；——第9部分：哺乳动物培养细胞染色体畸变

3、试验；——第10部分：致畸试验；——第11部分：致癌试验；——第12部分：人体皮肤斑贴试验。本部分为DB22/T396本标准仅供内部使用不得翻印-2017的第9部分。本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本部分代替DB22/T396-2014《保健用品毒理学评价程序与检验方法》，与DB22/T396-2014相比，结构做了较大调整。除编辑性修改外，主要技术变化如下：——增加了警示；——增加了范围；——修改了标本制作；——修改了镜检；——修改了结果评价。本部分由吉林省卫生与计划生育委员会提出并归口。本部分起草

4、单位：吉林省疾病预防控制中心。本部分主要起草人：孟令仪、宋昕恬、张晶莹、吴晓刚、孙兰、隋自洁、高峰。本部分所代替标准的历次版本发布情况为：——DB22/T396-2004；——DB22/T396-2014。I本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T396.9—2017保健用品毒理学评价程序与检验方法第9部分：本标准仅供内部使用不得翻印哺乳动物培养细胞染色体畸变试验警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符

5、合国家有关法规规定的条件。1范围本标准规定了保健用品毒理学哺乳动物培养细胞染色体畸变试验评价程序。本标准适用于保健用品毒理学哺乳动物培养细胞染色体畸变试验检验方法。2哺乳动物培养细胞染色体畸变试验2.1细胞哺乳动物原代或传代培养细胞。建议首选中国仓鼠肺细胞（CHL）。本标准仅供内部使用不得翻印2.2剂量至少用三种不同剂量进行测试。一般以50%细胞生长抑制浓度（ID50）为测试的最高剂量。为此，在测试之前，应测定受试物对培养细胞ID50，以受试物作用24h为准。对于无细胞毒性的化合物，最高浓度应是5μl/ml,5mg/m

6、l或0.01mol/L，用倍量稀释法确定中、低剂量。2.3代谢活化应用诱导剂处理后的哺乳动物肝微粒体酶（S9），进行体外代谢活化试验，即在加S9mix和不加S9mix平行的条件下测试。2.4受试物作用时间受试物和细胞需接触适当时间后进行观察。非活化一般在接触24h和48h后收获细胞，代谢活化作用6h以上。2.5对照组设置a)空白对照：即受试物浓度为0的对照；b)溶剂对照：生理盐水或受试物的溶剂对照；c)阳性对照：可采用环磷酰胺、丝裂霉素等已知染色体畸变试验阳性的化合物；d)S9mix对照作对照。2.6标本制作2.6.1

7、消化1DB22/T396.9—2017用0.25%胰蛋白酶溶液消化细胞，待细胞脱落后，加入含10%胎牛或小牛血清的培养液终止胰蛋白酶的作用，混匀，放入离心管以800r/min～1000r/min的速度离心5min，弃去上清液。2.6.2低渗本标准仅供内部使用不得翻印加入0.075mol/L氯化钾溶液2ml,用滴管将细胞轻轻地混匀，放入37℃细胞培养箱中低渗处理30min～40min。2.6.3固定加入2ml固定液，混匀后固定5min，以800r/min～1000r/min的速度离心5min，弃去上清液。重复一次，弃去上

8、清液。2.6.4滴片加入数滴新鲜固定液，混匀。用混悬液滴片，自然干燥。玻片使用前用冰水浸泡。2.6.5染色5%～10%姬姆萨染色，15min～20min。2.7镜检每种浓度至少观察100个分散良好的中期分裂相（染色体数2n+2）进行染色体畸变分析，在油镜下观察染色体畸变数和畸变类型，本标准仅供内部使用不得翻印在分析时应记录每一观察