SDF-1对神经干细胞在大鼠脊髓损伤恢复中作用的影响.pdf

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterTheimpactofSDF一1onneuralstemcellsintherecoveryofspinalcordratspinalcordinjuryByQiuZhenZhangSupervisor：Prof．Gang—HuaGouMedicine：RehabilitationMedicinetheFifthClinicalCollegeApril2014原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在

2、导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学术论文作者：R期：年月同学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以

3、采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学术论文作者：同期：年月日摘要SDF-1对神经干细胞在大鼠脊髓损伤恢复中作用的影响研究生姓名：张秋珍导师姓名：郭钢花郑州大学第五临床医学院河南郑州450052背景和目的基质细胞衍生因子．1(stromalcell．derivedfactorl，SDF．1)属CXC趋化因子亚家族，最初从骨髓基质细胞中克隆发现，是一类对某些细胞具有趋化作用的分

4、泌型多肽。SDF．1在体内通过与趋化因子受体结合参与调节体内多种生理或病理过程，特别是与中枢神经损伤后的炎症反应、各种内源性干细胞向病灶部位的募集及局部新生血管的形成有密切关系。本研究主要通过体内外实验来观察SDF．1是否影响神经干细胞的迁移，进而影响脊髓损伤后大鼠下肢功能恢复。资料与方法1．神经干细胞的提取、培养、鉴定及细胞荧光标记：通过解剖新生SD(Sprague—Dawley)大鼠获得大脑组织，利用无血清神经干细胞培养基培养，获取神经干细胞，并观察其增殖分化，然后应用免疫荧光法鉴定神经球表面巢蛋白和Westernb

5、lot鉴定CXCR4蛋白的表达，使用CM—Dil对神经干细胞细胞进行标记。2．实验分组：体外Transwell迁移实验中，根据不同浓度的培养条件将实验分为4组：①对照组(下室不加SDF．1，神经干细胞不经AMD3100孵育)；@AMD3100组(下室不加SDF．1，神经干细胞经AMD3100孵育)；③sDF．I+AMD3100组(下室加SDF．1，神经干细胞经AMD3100孵育)；@SDF．1组(下室加SDF—l，神经干细胞不经AMD3100孵育)。体内实验中将72只成年雌性SD大鼠按随机数字表法分为4组：①空白对照组(

6、不移植神经干细胞)；②神经干细胞移植组；③神经干细胞联合SDF—l移植组；@AMD3100孵育神经干细胞移植组。l摘要3．大鼠脊髓损伤模型的制作、细胞移植及标本制作：应用自制改良Allen’S打击器制备大鼠脊髓损伤模型，在造模成功7天时通过尾静脉进行神经干细胞移植。在大鼠损伤后的1、7、14、2l、28天，分别对各组脊髓损伤大鼠进行BBB(Basso．Beattie．Bresnahan)后肢功能评定，随后处死大鼠，取出脊髓标本进行冰冻切片，观察脊髓局部荧光及病理HE染色结果。4．统计学方法：统计数据用均数±标准差(又±S

7、)表示，统计分析采用SPSSl7．0统计专业软件包进行处理，采用单因素方差分析(Analysisofvariance，ANOVA)进行多组之间定量资料比较，各组问的两两比较使用S—N—K(Student—Newman．Keulstest，S．N．K)检验，P<0．05时认为结果具有统计学差异。结果1．从新生SD大鼠脑组织中经分离、培养得到的神经干细胞能形成神经球，细胞免疫荧光鉴定细胞巢蛋白表达阳性，且SDF．1相应受体CXCR4在神经干细胞表面表达阳性。2．在体外Transwell迁移实验中，随着SDF．1浓度梯度增加(

8、50-200ng／m1)，下室神经干细胞迁移数目不断增加，说明迁移细胞数量和SDF．1浓度呈正相关，与对照组相比差异具有统计学意义(尸0．05)；CXCR4的阻断剂AMD3100能明显抑制SDF．1趋化迁移效果，与对照组相比差异无