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1、实验二十高氏1号培养基的制备一、目的要求通过对高氏1号培养基的制备，掌握配制合成培养基的一般方法。二、基本原理高氏1号培养基是分离和培养放线菌的合成培养基。这种培养基是由可溶性淀粉（作为碳源）,KN03（作为氮源）,NaCKK2HPO.-3H20.MgS04・7也0（作为无机盐，为微生物提供钠、钾、磷、镁、硫等离子）和FeSOi•7H2O（作为微生物的微量元索，提供铁离子）等组成。由于磷酸盐和镁盐相混合吋产生沉淀，因此，在混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分。对于象FeS（X•7II2O这样的微量成分，则可预先配成高浓度的贮备液，在配制培养基时按需要加入一定的量。高氏1
2、号培养基配方如下：可溶性淀粉20gNaCl0.5gKNOalgK2HPO4•3H200.5gMgSO,•7也00.5gFeSO.•7H200.Olg琼脂15—20g水1000mlpH7.4—7.6三、器材可溶性淀粉,KNO3,NaCl,K.HPO,•3H,0,MgSO.•7H2O,FeSO,•7H：＞0,琼脂，lmol/LNaOH,lmol/LIICl；试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH5.5—9.0）,棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。四、操作步骤1.称量和溶化按配方先称取可溶性淀粉，放入小烧杯小，并用少量冷水将淀粉调
3、成糊状，再加入少于所需水量的沸水屮，继续加热，使可溶性淀粉完全溶化。再称取其他各成分依次逐一溶化。对微量成分FeSO,•7H；，0可先配成高浓度的贮备液后再加入，方法是先在100ml水中加入lg的FeSO,•7也0配成0.01g/ml,再在1000ml培养基中加入lml的0・01g/ml的贮备液即可。待所有纱品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如要配制固体培养基,其溶化过程同实验十九。2.pll调节、分装、包扎、灭菌及无菌检查同实验十九。五、实验报告思考题(1)什么叫天然培养基？什么叫合成培养基？(2)配制合成培养基加入微量元索吋最好用什么方法加入？天然培养基为什么不需要另加微量元
4、素？实验五微生物培养基的配制和灭菌培养基是将微生物生长繁殖所需要的乞种营养物质，用人T方法配制而成的乞种营养基质。培养基为微工物的工长提供营养物质和工存空间。它具有微工物正常化活所需的各种养料和适宜的环境条件；(1)适当组分和比例的营养物质；(2)适宜的pH值；(3)合适的渗透压；(4)保持无菌状态。所以培养基是培养微生物所必需的最主要材料。培养基的配制是微生物学工作者的主要技术操作之一。培养基的种类：根据培养基的组成成分，可将培养基分为三类：合成培养基：市各种纯化学物质按一定比例配制而成。半合成培养基：由一部分纯化泽物质和另一部分天然物质配制而成。天然培养基：利用天然來源的有机物配
5、制而成的。从培养基的物理状态來分：液体培养基：不加凝固剂的液态状培养基°］古I体培养基：在液体培养基屮加入2%左右的凝固剂的固体状培养基或固体状农副产品培养基。半固体培养基：在液体培养基中加入0.2%・0.5%凝【古I剂而成的半周体状培养基。微生物最常用的凝固剂为琼脂（其次为明胶），乂叫洋菜、冻粉。它不是一种营养物质，只能被极少数种类的细菌分解利用。琼脂是从海藻屮（主要是右花菜）提収而制成的。是一种多糖类化合物，上要成分是复杂的多糖硫酸酯钙盐，琼脂是一种川逆性胶休，在常规浓度下加热到96C以上即成溶胶状态，融化的琼脂，当温度下降到42°C以下，乂凝固为固体。一、目的要求1.了解培养基
6、的配制原理和方法，掌握其配制过程。2.了解儿种灭菌方法,掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。3.熟悉分离、培养微生物前的有关准备T•作及操作方法。二、实验材料1.药品：牛肉膏、蛋白豚、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖;可溶性淀粉、K2HPO4、KN03、MgSO4-7H2O>FeSO4・7H2O等。2.髙圧蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀菌灯。3.其它：大平、牛角匙、电炉、1NHC1、INNaOH、pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养血、吸管、齐种包装纸防水纸、绳索、棉花、标签等。三、实验程序
7、（一）、培养基配制1•培养基配制的-•般方法和步骤（1）称量：按照培养基配方，正确称取各种原料放于搪瓷杯屮。（2）溶化：在搪瓷杯屮加入所需水量（根据实验需要加入蒸帼水或自來水），用玻棒搅匀，加热溶解。（3）调pH值（调pH也可以在加琼脂后再调），用INNaOH或1NHC1调pH,用pH试纸对照。表6-1琼脂和明胶的特性比较比较项目琼脂明K比较项目琼脂明胶«点X)9625微生物可利用性绝大多數微主物部分微生物凝固点（亡）4020不能水無利用能水餅利用酸離度敎
