思考题完整(精).doc

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1、•On冷冻电镜技术与常规电镜技术有哪些差别?•定向包埋的目的是什么？怎样进行定向包埋？目的：用包埋剂逐步取代样品屮的脱水剂，使细胞内外所有空隙都被包埋剂所填充。定向包埋法：定向包埋方法是先在定向包埋板内加入配制好的包埋剂，再将样品按所需方向放入包埋板的尖端，加温聚合示，将带有固化包埋剂的样品从包埋板中取出，夹在特制的鸭嘴形样品夹屮,再进行定向超薄切片。•常规包埋的具体步骤是什么？a.将胶囊或包埋板放入60°C干燥箱甩烘干2小时左右；b.用吸管吸取配好的包埋剂灌满胶錢或包埋板，在其一侧放入用硫酸纸写好的样品标签小纸条（包括课题号、口期、包埋块号别等）；c.用牙签挑起样品，

2、放入胶囊屮央，静放数小时后样品会自然下落到胶囊的底部；d.将胶囊或包埋板放入恒温箱内加温聚合。加温时先37°C〜45°C1天，后60°C恒温箱聚合2〜3天。•包埋时要注意什么？1.浸透、包埋用注射器、吸管、烧杯、胶變、牙签及其它器1UL,均应在用前烘干，不能有任何水分；用后要及时清洗盛过包埋剂的容器，否则树脂固化后难以清洗。清洗时先用废纸擦净剩余的包埋剂，而后再用丙酮洗净。2.所用药品均应注意防潮，药品应在干燥器屮存放或在冰箱里保存。但从冰箱屮取出的药品必须等到恢复至室温时才允许打开盖了，否则水分会进入药品内。3.包埋时动作要轻巧，避免产生气泡影响切片。4.操作时皮肤切

3、勿接触包埋剂，以防引起皮炎，有的包埋剂有致癌作用，应注意防护。5.制好的包埋块应放在带盖的小瓶里，存放在干燥器屮，以防止包埠块吸潮变软影响切片。•618#树脂包埠剂配方是什么？618#树脂6mlDDSA4mlDBPDMP-300.3—0.8ml0.1—0.2ml•常用的脱水剂是什么？请冋答具体步骤？脱水时要注意什么？乙醉和丙酗。彻底清洗样品30分钟以上（屮间换液数次）50%乙醉或丙酮70%乙醉或丙酮80%乙醇或丙酗90%乙醇或丙酮100%乙醇或丙酮10〜15分钟10〜15分钟（如因工作安排关系，可置4°C冰箱内过夜）10〜15分10〜15分钟2次，每次30分钟。游离和培

4、养细胞的脱水时间可适当缩短。注意：.脱水彻底，100%乙醉或丙酮应绝对保证无水（用无水硫酸钠、无水硫酸铜等吸水处理）。2.当天完不成浸透、包埋时，将样品停留在4°C70%脱水剂屮保存过夜，一般认为70%的浓度时所引起的纽•织块体积变化最小。高浓度的脱水剂屮不可停留过夜、不仅引起组织内过多物质被抽提，而且会使组织块发脆造成切片困难。3.脱水时，动作要尽量迅速，特别是100%脱水剂时，更要注意样品块不要在空气屮停留时间过长，否则会造成样品干燥，使样品内产生小气泡致使包埠剂难以浸透。潮湿季节在空气屮暴露时间过长也会吸水受潮。•常用的固定剂戊二醛与娥酸行什么优点与缺点？固定时要

5、注意什么？戊二醛固定剂优点：①对组织的渗透力比饿酸大，而且能保存组织内某些酶活性；②与蛋H质Z间的反应较快，能较好地保存蛋白质的结构；③对细胞内的微管及滑iflj内质网、线粒体等膜性结构保存较好；④可以较好地固定和保存组织里的糖原；⑤能够较好的固定植物组织。缺点：①没有电了染色作用，单独用它固定的生物样品电了反差不好；②脂类及其他一些微细结构，在脱水时易被提取出来。（戊二醛一俄酸双重固定法：固定法可充分发挥戊二醛与四氧化娥二固定剂的优点，有利于保存细胞内各种微细结构）•取材时的原则是什么？为什么要小？快、准、轻、小、低的原则。因为液的穿透能力都比较弱，所以为了保持样品近

6、于生活状态的微细结构，取材大小当然要与固定液的穿透速率相适应，一般以lmm3为宜。样品过大时内部固定不良，样品过小时观察的目标又会受到局限。•影响固定效果的因素有哪些？固定液酸碱度（pH值）渗透压缓冲液固定液的温度、时间样品块的大小组织结构如表皮的腊质、细胞壁等•超薄切片会有哪些缺陷？怎样产生？如何消除？%1刀痕（垂肓于刀刃的纹路），产生原因：a.刀刃上有细的锯齿b.刀刃上有脏物c.纟R织屮有硬质材料，排除方法：选择无锯齿的刀刃；除去脏物；修去硬材料。%1康颤（平行于刀刃的周期性的疏密相间的纹路），产生原因：乩包埋块太软或太硬；b.切面、间隙角、切速太大；c.样品头或刀

7、固定不紧；d.刀与样品块间发生一种原因不明的高频振动。排除方法:a.调整包埠剂配方，改变包埋块的切削性能；b.作适当的调整；c.挤紧所有可动部分；d.改变切片速度或调节微调进刀以破坏这种固有频率的振动。%1褶皱（切片挤压有不规则的褶叠），产生原因：a.包埋块太软；b.刀钝；c.切面太大；d.切片速度太快，排除方法：a.重新加温聚合或更换包埋块；b.换刀；c.缩小切面；d.降低切削速度%1切片中有空洞,产生原因：a.包埋剂中有气泡、浸透不好;b.样品中有硬质材料,排除方法:a.消除气泡、使浸透完全；b.削去硬质材料%1同一张切片上的厚度不均