专题八 生物技术实践1.ppt

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1、一、微生物的基本技术1.制备培养基：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。2.无菌技术：主要指消毒和灭菌。3.倒平板操作：待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰旁倒平板。4.微生物接种技术：（1）平板划线操作：平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。（2）稀释涂布平板法：先将菌液进行一系列梯度稀释后涂布平板，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散到培养基的表面，从而在培养基表面形成单个菌落。如图：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的

2、湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。二、微生物的营养、分离与计数1.微生物的营养2.某种微生物的分离与计数（1）分离——选择培养基。（2）计数①土壤中分解尿素的细菌的分离与计数a.筛选菌株：利用选择培养基筛选菌株。b.计数方法：活菌计数法和显微镜直接计数法。c.过程：土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察。②分解纤维素的微生物的分离a.实验原理即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。b.流程：土壤取样→选择培养→梯度稀释→涂布平板→挑选

3、菌落。(3)鉴定方法①平板划线法适用于微生物的纯化，但不能用于微生物的计数。②稀释涂布平板法常用于活菌计数法，而显微镜直接计数法不能区分细菌的死活。用稀释涂布平板法进行计数时，为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。③土壤中纤维素分解菌的筛选流程中的“选择培养”是否需要，应根据样品中目的菌株数量的多少来确定。三、微生物在传统发酵技术中的应用果酒、果醋制作过程中防止杂菌污染的措施①榨汁机和发酵瓶等都需清洗干净，且发酵瓶要进行消毒。②清洗葡萄时要先清洗后除枝梗。③发酵瓶排气管用曲颈管，不用直

4、管。微生物培养的操作要领【典例1】(2011·新课标全国卷)有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染，某同学欲从污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：(1)在筛选的过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_______为惟一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于______培养基。(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常用的接种方法有两种，即_______和_______。(3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力______。(4)通常情况下，在

5、微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、______和______。无菌技术要求实验操作应在酒精灯_______附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。【标准解答】解答本题的关键是：掌握微生物的实验室培养技术，包括培养基的分类、灭菌方法、无菌操作等技术。(1)实验目的是为了筛选出可以降解原油的高效菌株，因此在筛选的时候选择培养基的惟一碳源为含有碳元素的原油。(2)纯化分离微生物的方法有两种：平板划线法和稀释涂布平板法。(3)菌株分解周围的营养物质，出现分解圈，分解圈大说明该菌株的降解能力强。(4)实

6、验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌；微生物的培养要求严格的无菌技术，操作时在酒精灯火焰附近进行，避免周围其他细菌的污染。答案：(1)原油选择(2)平板划线法稀释涂布平板法(3)强(4)干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰拓展提升1.微生物培养技术中的消毒和灭菌2.平板划线操作的注意事项(1)每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌。（2）灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。（3）划线时最后一区域不要与第一区域相连。（4）划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。1.(1)在大肠杆菌培

7、养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑______、_______和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、______、______等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。(2)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行______(消毒、灭菌)；操作者的双手需要进行清洗和_______；空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能______。(3)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，

8、还应保证待测样品稀释的______。(4)通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的______。(5)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是___________________。(6)若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过______处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散，造成污染。【解析】(1)大肠杆菌具有体