[精品]五指毛桃组织培养.doc

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1、五指毛桃组织培养班级：09级生物教育姓名：李虎学号：09124097摘要：组织培养所用的材料非常广泛，可采取根、茎、叶、花、芽和种子的子叶,有吋也利用花粉粒和花约，我们以五指毛桃的茎为外植体，1/2MS培养基加不同生长调节剂进行组培，如，不定芽诱导培养基为，l/2MS+BA1.0mg/L+NAAl・0mg/L和l/2MS+BA1.5mg/L+BAA0.5mg/L,增值培养基为；1/2MS+6-BAO.5mg/L,生根培养基为；1/2MS+IBA1.Omg/Lo关键词：五指毛桃组织培养五指毛桃原植

2、物为桑科粗叶蓉，多为灌木，稀为小乔木，全株密被粗毛。以根入药治疗肝炎健脾化湿，行气化痰，舒筋活络。用于帅结核咳嗽，慢性支气管炎，风湿性关节炎，腰腿疼，脾虚浮肿，病后盗汗，白带等症。五指毛桃主要分布于我国的东南部及西南部各省，以野生为主，极少人工栽培，由于五指毛桃多浆汁，体表多破毛，组培过程屮易褐化，不易诱导愈伤组织和不定芽，很难获得组培苗。但这还是值得进行组培的。从外植体选择、植物牛长调节剂使用、组织培养条件和褐化控制等方面去了解五指毛桃组培技术。一、材料和方法，（1）初代培养，采集前得准备工作

3、，用75%的酒精消毒剪刀，准备装材料的保鲜膜、保温容器，保温材料和标签，外植体采集，采用发育正常、无病虫害的，长势好的半年生枝条，切取含顶芽或腋芽的4-5cm的茎断作为外植体，先用自来水反复冲洗，先将材料用流水冲洗干净，最后--遍用蒸倔水冲洗，再用无菌纱布或吸水纸将材料上的水分吸干，再经5度低温处理24小时和VC等防褐化浸泡30分钟，在无菌坏境小将材料放入70%洒精屮浸泡30-60秒，再将材料移入漂白粉的饱和液或0.01%升汞水屮消毒10分钟，取出后用无菌水冲洗三、四次洗净晾干备用。之后在无菌条

4、件下，将顶芽或腋芽茎节切成0.5——lcm的茎段，用锡子夹起斜插入诱导培养基上，腋芽朝上，尽量让腋芽与培养基的表面接触，培养基是以1/2MS为基本培养基，附加不同浓度生长调节剂培养。（2）继代培养，选择经初代培养成功的芽从切割成单芽，并将单芽丛屮高2cni以上的单芽切割成含一个腋芽的茎段，这就是外植体。在操作屮严禁用手触动材料。在尢菌坏境下，将切好的外植体立即接在培养基丄，每瓶接种10-30个以1/2MS为基本培养基，加入不同浓度的植物生长调节剂培养。接种后，瓶、管用无菌药棉或盖封口，培养皿用无

5、菌胶带封口。用1500IX和30001s光照处理。（3）生根培养，当芽苗长高时，转移到1/2MS+NAA1.Omg/L或；1/2MS+IBA1.Omg/L生根培养基JL诱导生根，并选择2—3cm高芽苗，用500mg/LIBA溶液速蘸处理，直接诱导生根，成苗后先敞口炼苗1—2天，然后取出幼苗，洗净附在苗上的培养基，切去较大的叶片，移到珍珠岩：蛭石：腐殖土二0.5:1:0.5的基质屮，基屮腐殖土要充分灭菌，试管苗从无菌到光、温、湿稳定的坏境进入自然环境，必须进行炼苗。一般移植前，先将培养容器打开，于

6、室内自然光照下放3天，然后取出小苗，用自来水把根系丄的营养基冲洗干净，再栽入已准备好的基质屮，基质使用前最好消毒。移栽前要适当遮荫，加强水分管理，保持较高的空气湿度（相对湿度98%左右），但基质不宜过湿，以防烂苗。10天后，可以逐步降低湿度，使英能够适应H然条件生长。培养基所加蔗糖浓度均为2.5%,琼脂0.8%,PH值为5.8,在1.2Kg/cm2压力下灭菌20分钟，接种后置于20°C,在1000IX和2000仪光照条件下，每天光照12小吋培养。二、培养小的问题处理，（1）抗褐化处理，一些未经V

7、C处理的材料，培养一天后就会出现褐变，先是外植体周囤变褐，培养基亦随之变褐，失去培养作用，外植体会在一个星期内死广，而VC浓度增高抗褐化的效果愈明显，以1000mg/L效果最好。还要注意温度对褐化的影响。（2）植物生长调节剂组合对茎节诱导的影响，外植体经VC处理后，将带有顶芽或者腋芽的茎节，接种到含不同配比植物生长调节剂的培养基屮培养，10天外植体的基部节间膨胀，25天后整个外植体均膨胀，并从切面上长出许多小芽，以1/2MS培养基附加1/2MS+BA1.Omg/L+NAAl.Omg/L和1/2M

8、S+BA1.5mg/L+BAA0.5mg/L,1/2MS+BA1.Omg/L+BAAl.Omg/L等培养配料，以1/2MS+BA1.Omg/L+BAAl.Omg/L对顶芽的诱导率最高，芽长势较好，而附加其他生长调节剂的诱导率较低，芽较小,长势不好或者生长较慢，1/2MS+BA1.5ing/L+BAA0.5mg/L培养基对腋芽茎节诱导效果最佳，长势也较好。（3）植物生长调节剂组合对不定芽增殖的影响，将诱导出的小芽分别置于不同的培养基上诱导，45天后形成芽从，将丛生芽切除，继续放在培养瓶屮培养，加入