气相色谱-质谱法对当归及其炮制品挥发油的指纹图谱和潜在标志物研究.pdf

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1、第4O卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第4期2012年4月ChineseJournalofAnalyticalChemistry602～607气相色谱一质谱法对当归及其炮制品挥发油的指纹图谱和潜在标志物研究华永丽魏彦明郭延生吴海燕曲亚玲(甘肃农业大学动物医学院，兰州730070)摘要建立了一种基于气相色谱一质谱技术(GC—MS)的化学指纹图谱，以发现当归及其不同炮制品潜在标志物的方法。利用GC—MS获得当归及其不同炮制品挥发油化学指纹图谱，对产生的75样本×259变量数据进行归一化、修正80％规则和数据缩

2、放等方法预处理，通过正交校正偏最小二乘法(OPLS)模式识别方法对样品进行模式识别，根据模型的变量重要性因子(VIP)和非参数检验结果筛选出12个潜在标志物。经相关分析和结构鉴定，其中11个化合物分别被鉴定为丁内酯、萜烯醇、6_丁基一1，4环庚二烯、2一壬酮、十一烷酮、2一甲氧基苯酚、榄香烯、4,5，6，7_四甲基苯酞、Z_丁烯基酞内酯、亚油酸甲酯、l，7-异丙基4_甲基一1，4，5，6，7，7a-／~q氢一2H一茚2酮。关键词中药材；炮制；化学指纹；气相色谱～质谱联用；当归；标志物l引言近年来，中药化学指纹图谱已广

3、泛应用于中药质量标准研究。涉及的方法包括：高效液相色谱指纹图谱～1、气相色谱指纹图谱、薄层色谱指纹图谱嘲、高速逆流色谱指纹图谱嘲、毛细管电泳指纹图谱和红外光谱指纹图谱ol等。这些方法以“识别指纹图谱”的表现形式控制中药饮片及复方的质量，而建立在中药指纹图谱基础之上的大量化学数据中，发现潜在的标志物对评价中药饮片质量是非常有意义的。当归为伞形科当归属植物当归(Angelicasinesis(Oliv．)Diels)的干燥根”，主产于甘肃岷县、漳县、渭源、宕昌等地，是甘肃的道地药材之一『l1。当归中含有内酯类、生物碱类、

4、有机酸类或酚类以及中性挥发油等多种成分。在中医药临床中，可对当归采用不同的炮制处理，以发挥不同的疗效。当归常用炮制品有油当归、酒当归、土当归、当归炭等[13】。本研究以当归及其不同炮制品为例，以气相色谱一质谱联用(GC—MS)为分析方法，运用统计分析手段，建立从化学指纹图谱中发现不同炮制品潜在标志物的方法。2实验部分2．1仪器、试剂与材料6890N／5973N型GC—MS气质联用仪(美国Aglient公司)；挥发油提取器(5mL一24#标准口，天津市天玻玻璃仪器有限公司)，DM内热式玻璃纤维电热套(山东省永兴仪器厂)

5、。当归药材采自甘肃，由甘肃农业大学动物医学院魏彦明教授鉴定为A．Sinensis(表1)。石油醚、乙醚、无水NaSO等均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。炮制所用辅料黄酒、香油均购于当地超市；土粉由甘肃中医学院炮制教研室提供供炮制用辅料。2．2当归不同炮制品的制备[1”(1)酒当归取当归片，加黄酒拌匀，稍闷，待酒被吸尽后，用文火炒至深黄色，微具酒香气时，取出放凉，每100kg当归，用黄酒10kg。(2)土当归将土粉置锅内炒热，倒入当归片，微炒至当归片粘满细土时取出，筛去土粉，放凉即可，每100kg当归，用土粉30kg。

6、(3)当归炭取当归片，置锅内，用中火炒至当归外表焦黑色，内部棕褐色，略具焦气，质枯脆时，取出放凉。(4)油当归取净当归片，加入3％的香油拌匀，闷润，文火炒至色泽加深，微显焦斑，待显油润有香气时出锅，晾凉。样品编号见表1。201lO721收稿；2011—1l一24接受本文系国家自然科学基金(No．30972210)资助项目*E-mail：weiym@gsauedu．6n第4期华永丽等：气相色谱一质谱法对当归及其炮制品挥发油的指纹图谱和潜在标志物研究603表1当归及不同炮制品标号及样品信息Table1OriginsofA

7、ngelicasinensis(oliv．)Dielsandsamplecodeofprocessedproducts2．3挥发油提取(1)水蒸汽蒸馏提取方法按《中国药典)2005年版一部(附录)，提取样品挥发油，以无水NaSO脱水。(2)有机溶剂提取法准确称取样品200g，粉碎后过40目筛，加入6013mL石油醚，5O℃回流提取2次，合并回流提取液，浓缩得到黄棕色的挥发油。2．4气相色谱一质谱分析条件OV1701色谱柱(5OmX0．2埘mX0．25¨m)。载气：氦气，柱温采用程序升温：以8℃／min升温速率从40℃

8、升至150℃，恒温10min；以4℃／rnin从150℃升至220℃，恒温10min；以2℃／min升温速率从220℃升至250℃，恒温1min。汽化温度280℃，尾吹40mL／min。质谱接口温度250℃，电离方式EI，发射电流150ktA，检测器电压350离子源温度200℃，电子能量70eV,扫描范围：33～550AMU。2．5指纹图谱建立