辅酶Ⅰ生产工艺.doc

《辅酶Ⅰ生产工艺.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、辅酶Ⅰ生产工艺辅酶Ⅰ（CoⅠ，又称NAD+、DPN+）为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，是脱氢酶的辅酶，在生物氧化过程中作为氢的受体或供体，起传递氢的作用，可加强体内物质的氧化并提供能量。临床试用于精神分裂症、冠心病、心肌炎、白细胞减少症，急慢性肝炎、迁移性肝炎及血小板减少症，也是重要的多种酶活性的诊断试剂。1.化学结构和性质CoⅠ是由烟酰胺及腺嘌呤各一分子与D-核糖及磷酸各两分子组成的。排列顺序为烟酰胺-D-核糖-磷酸-D-核糖-腺嘌呤。CoⅠ是具有较强的吸湿性的白色粉末，易溶于水或生理盐水，不溶于丙酮等有机溶剂，为两性分子，等电点PH3，在

2、干燥状态和低温下稳定。对热不稳定，水溶液偏酸或偏碱都易破坏。广泛存在于动植物中，如酵母、谷粒、豆类、动物的肝脏、肉类等。制备时用酵母作原料，分离提取。2.以酵母为原料的制造工艺2.1技术路线PH2～2.5，0℃PH＝7PH2～2.5（干燥）丙酮（沉淀）HNO3（中和、吸附）001×7树脂，NH4OH，201×7树脂（洗脱）NH4OH16小时（吸附）HCI，122树脂（破壁、提取）沸水，冰块新鲜压榨酵母提取液（分离）201×7树脂滤液吸附物洗脱液吸附物（洗脱、吸附、洗脱）KCI，766型活性炭，丙酮：乙酸乙酯：水：浓氨水洗脱液沉淀物Co

3、Ⅰ成品22.2工艺过程2.2.1破壁、提取、分离：将新鲜压榨酵母在搅拌下加入等量的沸水中，加热至95℃保温5分钟，迅速加入2倍酵母重量的冰块。过滤，滤饼用常水洗涤2次，合并滤、洗液，得约为酵母重量5倍的提取液。加入强碱性季铵Ⅰ型阴离子交换树脂201×7（717），搅拌16小时，过滤，收集滤液。2.2.2吸附、洗脱：取滤液用浓盐酸调PH至2～2.5,流经弱酸性丙烯酸系阳离子交换树脂122树脂柱吸附CoA，滤液︰树脂＝1︰0.0146（W∕W）,控制流速6L∕min。吸附完毕，用无热原水先逆流后顺流洗涤至流出液澄清为止，流速为10L∕mi

4、n，再用0.3mol∕L氢氧化铵液以2L∕min流速进行洗脱，用量为122树脂的5.5～6倍（V∕W）。当流出液呈淡咖啡色，经340nm分光测定，OD值大于0.05（稀释15倍）时，开始收集，直至流出液呈淡黄色，而OD值小于0.05时为止，得洗脱液。2.2.3中和、吸附：将强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂001×7（732）加至洗脱液中（按洗脱液8～9.3L加树脂1Kg计），搅拌，测PH应为5～7，过滤，滤饼用无热原水洗涤，合并洗滤液，加稀氨水约15﹪左右，调PH至7（不低于7），得中和液。再将中和液流经强碱性季铵I型阴离子交换树脂201

5、×7（717）50～60目柱进行吸附（按中和液7L加树脂1Kg计），控制流速为1L∕min，流出液呈棕色。吸附完，用无热原水以10L∕min流速，顺流洗涤201×7树脂至流出液澄清无色为止。2.2.4洗脱、吸附、洗脱：将766型活性炭60～80目柱与201×7树脂柱串联，用0.1mol∕L氯化钾液以1L∕min流速洗脱201×7树脂柱吸附物（按1Kg树脂需16L计），洗脱液立即流经活性炭柱进行吸附，吸附完后，解除两柱串联，先后用PH9的无热原水及PH8的4﹪乙醇，以1L∕min的流速，充分洗涤碳柱。最后用无热原水洗至中性，用丙酮︰乙酸

6、乙酯︰水︰浓氨水＝4︰1︰5︰0.02的混合液洗脱，收集用3倍丙酮测试产生白色浑浊的流出液，得洗脱液。2.2.5沉淀、干燥：上述洗脱液在搅拌下加入30～40﹪硝酸调至PH2～2.5,过滤，置与冷库，冰冻沉淀过夜。过滤沉降物，用95﹪冷丙酮洗涤滤饼2～3次，滤干，滤饼置五氧化二磷真空干燥器中干燥，即得CoⅠ。收率73.4g/t酵母废水，折合压榨新鲜酵母半吨。2