DB34∕T 1765-2012 动物油脂中胆固醇含量的测定 液相色谱串联质谱法.pdf

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1、ICS67.040X04DB34安徽省地方标准DB34/T1765—2012动物油脂中胆固醇含量的测定液相色谱串联质谱法DeterminationofcholesterolinanimalandvegetablefatsandoilsbyLiquidChromatographyTandemMassSpectrometry2012–12–24发布2013–01–24实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T1765—2012前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省质量技术监督局、安徽省食品质量安全检验方法标准化技术委员会

2、提出。本标准由安徽省食品质量安全检验方法标准化技术委员会归口。本标准起草单位：国家农副加工食品质量监督检验中心、安徽国家农业标准化与监测中心。本标准主要起草人：徐彦辉、何俊、顾亮、丁磊、姚艳如、房志杰、刘琴芳、聂磊、程坚、董恩恩。IDB34/T1765—2012动物油脂中胆固醇含量的测定液相色谱串联质谱法1范围本标准规定了动植物油脂中胆固醇含量的液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）测定方法。本标准适用于动植物油脂中胆固醇含量的测定。本标准的方法检出限为0.25mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件

3、，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分:总则与定义GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分:确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法3原理样品经凝胶渗透色谱净化后，用液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）进行分析，采用标准曲线法定量。4试剂4.1甲醇：色谱纯。4.2乙酸乙酯：色谱纯。4.3环己烷：色谱纯。4.4异丙醇：色谱纯。4.5乙酸乙酯+环己烷

4、（1+1）：取1000mL乙酸乙酯加入到1000mL环己烷中，混合均匀。4.6胆固醇的标准物质。4.7胆固醇标准贮备液（1.0mg/mL）：称取50.0mg的标准物质，用无水乙醇配置成浓度为（1.0mg/mL）标准储备液于50mL容量瓶中，于4℃的冰箱中避光保存，有效期6个月。4.8胆固醇的标准工作液：将标准贮备液用无水乙醇稀释至合适浓度，于4℃的冰箱中避光保存待用，有效期4周。注：除非另有说明，仅使用分析纯试剂。5仪器与设备5.1液相色谱-质谱联用仪，配APCI离子源。1DB34/T1765—20125.2凝胶渗透色谱分离系统（GPC）或等效

5、分离装置。5.3分析天平：感量0.1mg。5.4分析天平：感量0.01mg。5.5旋涡混匀器。5.6氮吹仪。6分析步骤6.1试样处理称取约0.5g样品（精确至0.01g），用乙酸乙酯+环己烷（4.5）定容至10mL，定容液经凝胶渗透色谱装置净化（参考条件见附录A），收集流出液，氮吹至近干，并无水乙醇定容至1mL，供LC-MS/MS测定。6.2平行试验按试样处理步骤，对同一样品进行平行试验测定。6.3空白试验除不称取试样外，均按试样处理步骤进行。6.4标准曲线的绘制将标准储备液依次稀释至浓度分别为0.05，0.1，0.2，0.4，1.0mg/L，

6、用LC-MS/MS进行分析测定，以标准工作溶液浓度为横坐标，定量离子的峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。6.5测定6.5.1色谱分析条件a)色谱柱：ZorboxSBC18（2.1mm×50mm，1.8µm）或柱效相当的色谱柱；b)柱温：35℃；c)进样量：10μL；d)流速：0.3mL/min；e)流动相：流动相A(0.1％甲酸异丙醇溶液)+流动相B（甲醇），20:80，等度洗脱。6.5.2质谱分析条件a)离子源：大气压化学电离源（APCI）；b)扫描方式：正离子扫描；c)检测方式：多反应监测（MRM）；d)雾化气（NEB）、气帘气（CUR）、

7、碰撞气（CAD）均为高纯氮气；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；e)喷雾电压、碰撞能等电压值应优化至最优灵敏度；f)定性离子对、定量离子对、碰撞电压和碰撞能量等参数见表1。2DB34/T1765—2012表1多反应监测模式参数名称母离子（m/z）子离子（m/z）驻留时间(ms)碰撞电压（V）碰撞能量（V）胆固醇369.3147.1(定性)20011025161.1(定量)200110256.5.3定性测定在6.5仪器条件下，试样溶液和标准品溶液的选择离子色谱峰在相同保留时间处（±0.5％）出现，并且对应质谱碎片离子的质荷比与标准

8、品一致，其丰度比与标准品相比应符合：相对丰度>50％，允许±10％偏差；相对丰度20％～50％时，允许±15％偏差；相对丰度10％～20％时，允许±2