2013届高三生物专题复习 微生物的培养与应用课件.ppt

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1、第2讲　微生物的培养与应用3．设置对照为了证实培养基是否被杂菌污染，设置的对照组应是：将不接种微生物的培养基置于恒温箱中培养。4．分离菌种的鉴定(1)方法：通过检测培养基pH的变化来判断。(2)原理：在细菌分解尿素的化学反应中，细菌分泌的脲酶将尿素分解成了氨，氨使培养基中碱性增高，pH升高。1．纤维素酶是一种酶(×)【提示】纤维素酶是一种复合酶，至少包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶。2．筛选纤维素分解菌可采用刚果红染色法，刚果红染色后的培养基上透明圈越大，说明纤维素分解菌越多(√)3．分离纤维素分解菌的流程是：土壤取样→选择培养→涂布到鉴别培养基上→培养→挑选产生透明圈的菌落(×)【提示】涂布

2、前应梯度稀释。说明：(1)加入培养基中的凝固剂(如琼脂)，一般不能被微生物利用，只起到凝固作用。(2)选择培养基一般只生长具有特定特点的微生物，鉴别培养基可以存在其他微生物，而且能鉴别特定的微生物。2．无菌技术(1)获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括以下几个方面：①对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。说明：酒精消毒时，体积分数为70%的酒精杀菌效

3、果最好。原因是浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌力减弱。1.平板划线法和稀释涂布平板法(1)平板划线操作①第一次划线及每次划线之前都需灼烧灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环，每次灼烧的目的如下表：第一次灼烧每次划线之前灼烧划线结束灼烧目的避免接种环上可能存在的微生物污染培养物杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使每次划线的菌种来自上次划线末端杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者②灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。③划线时最后一区域不要与第一区域相连。④划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破。(2)稀

4、释涂布平板①稀释操作时：每支试管及其中的9mL水、移液管均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离火焰1～2cm处。②涂布平板时：a．涂布器末端浸在盛有体积分数为70%的酒精的烧杯中，取出时，要让多余酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃。b．不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。c．酒精灯与培养皿距离要合适，移液管头不要接触任何物体。2．菌株筛选原理的比较土壤中分解尿素的细菌分解纤维素的微生物常用选择培养基进行筛选，即提供有利于目的菌株生长的条件，如营养、温度、pH等，同时抑制其他微生物的生长刚果红染色法，即在含有纤维素的培养基中加入刚果红，刚果红

5、与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被分解后，该复合物不能形成，培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈3.统计菌落数目(1)理论依据：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。(2)计算方法：每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M。其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；V代表涂布平板时所用稀释液的体积(mL)；M代表稀释倍数。(3)统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌

6、落。(4)为使结果接近真实值，要设置重复组，取其平均值。可将同一稀释度的样品接种到三个或三个以上的平板上。经涂布、培养计算出菌落平均数。说明：(1)显微镜直接计数法①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。②方法：用计数板计数。③缺点：不能区分死菌与活菌。(2)牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基应各有一个空白对照，即不涂布菌液，目的是验证培养基中是否含杂菌。(3)样品稀释度将直接影响平板上生长的菌落数。考向　微生物的实验培养与分离1．微生物的培养，消毒灭菌，利用选择培养基分离微生物，微生物的计数都是较为主要的命题点。2011年新课标全国高考T39、山东高

7、考T34,2009年宁夏高考T40、安徽高考T6都是考查的本考点的内容。2．2013年高考中微生物的实验室培养与分离的相关考点仍是命题的主要角度。(2011·新课标全国高考)有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_____________为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基