药物代谢动力学综述.doc

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1、干血点采样和微透析技术在药动学研究中的应用摘要:药动学研究过程中,传统的取样方法存在一定的缺陷,使新的方法应运而生,干血点采样技术和微透析技术就是其中两个。本文就它们的原理、目前在药动学方面的应用现状、优点与不足之处作概述。关键词:干血点采样微透析技术药动学进行药动学研究通常需要从牛物体采集大量的全血(临床前试验每个时间点通常采集100〜500U1,临床试验1〜5inl)以获得足够的血浆用于生物定量分析。应用传统的方法,在临床前试验中,每只动物只能获得一定体积的全血,如果用血量大,则需要将多只动物的血样混合,这往往导致药动学数据的可靠性下降,而且对动物的需求量增加。另外,血浆的处理要使用

2、固相萃取、液液萃取或者蛋口沉淀等方法,这些步骤耗时耗力,限制了检测通量和样品检测数量。最后,血样的运输和储存也存在实质上的困难,运输以及储存过程需要冻存并妥善处理。由此可见,研究新的采样方法对药动学的研究有着不容忽视的意义。本文就两种非传统采样方法进行综述。1•干血点釆样技术干血点采样(driedbloodspot,DBS),即将全血样品收集在卡纸上,作为一种采集生物样品的新型替代技术,在血样采集方法上比传统方法有一定的优势。它需求较少的血量(通常小于100UL),可减少动物使用,方便血样采集、存储运输,简化样品前处理。特别适合小动物的连续样品采集。有关DBS样品采集、干燥、储存和运输、

3、前处理等方面的综述如下:1.1DBS样品采集方法1.1.1DBS采样卡FTA和FTAElute卡,可用于DBS采样,两种卡通过适宜的化学试剂处理后,具备溶解细胞,使蛋白变性,并且抑制细菌等其他微生物生长的功能。1.1.2DBS样品釆集过程在临床前研究屮,小动物(如小鼠、大鼠)可以从尾部采血。血样可直接滴到采样卡的圆圈内,应避免直接接触到卡纸,尤其是在采样前和血样未干燥前。还应避免凝血、分层以及过饱和等情况的发生。血样应均匀分布在圆圈内,采样卡两侧血样的颜色应保持一致。如果样品被污染,出现溶血现象或者采样体积不够,均为不合格的采样。也可以使用加样枪将血样点到采样卡上,这样可避免潜在的血细胞

4、比容差异、采血量的影响、血样在采样卡上分布不均匀等采样错误。加样枪头应距离采样卡若干毫米,当血样碰触到卡时会迅速分散开,使血样在卡上分布均匀。1.2DBS样品干燥、储存和运输方法在储存和运输前将DBS样品充分干燥是十分重要的。一般而言,在室温开放环境(15〜22°C)下,干燥时间至少为2~3ho干燥时间取决于采样卡的类型以及采血量的多少。样品不应该加热、重叠放置或者接触其他表面,需耍的话应避免阳光直射。潮湿可能引起细菌牛长,改变提取效率或者促进不稳定分析物的降解,从而导致血样的分析质量下降。因此在干燥之后,为避免DBS样品接触水分或湿气,可用纸覆盖DBS样品并装进含有干燥剂的封口袋里,另

5、外,包装袋内应含有湿度指示剂。通过这种方式包装的DBS样品可在室温下储存数周至数年。如果样品含有不稳定的化合物,则应储存在低温环境(2~8°C、15°C或W—60°C)O按照上述方法包装的DBS样品可通过邮寄方式运输,在此期间不需考虑血样暴露或者传染性物质等问题。1.3DBS样品前处理方法1.3.1打孔位置的选择为考察全血在DBS卡上的分布情况,根据干血点的直径大小,选择中心及边缘位置打孔得到相同尺寸的滤纸片,处理后进行样品分析,随行标准曲线测定其浓度。研究表明,打孔位置会直接影响DBS样品定量分析的结果。如果点卡体积小而打孔面积大,那么所测结果的精密度会比较好;如果点卡体积大而打孔面积

6、小,那么所测结杲的精密度会比较差,原因可能是卡纸成分的干扰。唯一能精确地对待测物进行定量分析的方法为点卡体积完全相同,从卡上取下所有的血点。1.3.2离线提取在定量分析中,从DBS卡上打下一个或多个一定直径的圆片放入分析试管或96孔微量滴定盘中进行提取。提取时通常加入一定量的含有内标的提取溶剂(甲醇、乙月青或者一定比例的水-有机溶剂混合物)。选择合适的提取溶剂破坏基质或滤纸里分析物与蛋口的结合,并通过振荡或者涡旋等方式将分析物洗脱下来,涡旋时间一般为20〜60s,必要时也可采用超声处理来提高提取效率。离心之后,提取物手动或自动转移到试管或微量滴定盘中直接进样,或者吹干后用流动相复溶进样。

7、1.3.3在线提取最近有报道关于DBS样品的在线捉取方法。该方法基于“inoxcell”结构,可以将滤纸片上的分析物洗脱下來,随即导入LC-MS系统,从滤纸上释出的分析物通过色谱分离后进入质谱检测。1-4样品稳定性根据DBS的采样情况,应对分析物(以及代谢物)在室温下不同介质以及不同存放时间进彳亍稳定性考察,以确定DBS的存放条件和时间。具体的稳定性试验应包括•储备液的稳定性、样品处理后的溶液中分析物的稳定性、分析物在全血中的稳定性

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