狼毒组织培养及其黄酮类成分研究.pdf

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1、摘要狼毒(Stellerachamaejasme)，又名断肠草(内蒙古)，拔萝卜、燕子花(河北)，馒头花(青海)，是瑞香科(Thymelaeaceae)狼毒属(Stellera)多年生草本植物，是我国传统中药狼毒的正品，也是重要的蒙药和藏药，有清热解毒、消肿、泻火、止溃疡、祛腐生肌之功效。本研究以瑞香科狼毒属狼毒的叶片为外植体，探讨了不同浓度的2，4一D对愈伤组织诱导率的影响，得到了诱导愈伤组织的最佳2，4．D浓度；进行了不同接种量的细胞生长动态研究，确定了增殖培养适宜的接种量，并着重探讨了生长素类和细

2、胞分裂素类对愈伤组织增殖培养的效应，获得了愈伤组织增殖的最佳培养基配方；用比色法测定了愈伤组织中总黄酮的含量，研究生长素和细胞分裂素类对愈伤组织总黄酮累积的影响；采用DPPH自由基清除法探究了愈伤组织总黄酮提取物的抗氧化活性。本研究为狼毒的开发利用奠定了基础。主要结论归纳如下：1．以狼毒的叶片为外植体，诱导愈伤组织的最佳2，4一D浓度为1．Omg／L，诱导率可达98．33％，愈伤组织呈淡黄色，致密。2。愈伤组织生长量的动态研究表明：鲜重和干重的生长曲线均呈“S’’型，明显地分为：延迟生长期、指数生长期和

3、衰减期。3．单独使用2，4．D和KT对狼毒愈伤组织的增殖效应不明显并严重褐化；单独使用NAA增殖效应明显但褐化较明显；单独使用6-BA增殖效应很好但轻微褐化；单独使用TDZ增殖效应最好。生长素与细胞分裂素组合对愈伤组织的增殖效应比单～的植物生长调节剂好。MS+NAA0．5mg／L+TDZl．0mg／L是最佳增殖培养基，鲜重为14．499／瓶，是初始接种量的28．98倍，干重为0．619／瓶，为初始接种量的25．41倍。4．单独使用NAA和6-BA可促进愈伤组织中总黄酮的累积，而培养基中附加不同浓度的TD

4、Z时总黄酮的累积均低于NAA和6-BA。总黄酮累积的最佳培养基配方为MS+NAAl．0mg／L+6一BA0．25mg／L，总黄酮含量达10．779mg／g，明显高于野生狼毒根(总黄酮含量为10．104rag／g)。5．各样品总黄酮提取液都有明显的抗氧化活性，3．125}tl提取液的DPPH自由基消除率为42．222％．91．143％，且与总黄酮含量相关，相关系数为0．7191MS+NAAl．0m凹^6一BA0．25mg／L和MS+NAAl．0mg／L+6．BA0．5mg／L培养基培养的愈伤组织总黄酮的体

5、外抗氧化活性高于野生狼毒根，且野生狼毒根总黄酮的体外抗氧化活性高于抗坏血酸(Vc)。关键词狼毒，愈伤组织，黄酮，抗氧化ABSTRACTStellerachamaejasme，alsoknownasgelsemiumelegans(InnerMongolia)，removingthecarrots，swallowflowers(Hebei)，breadflowers(Qinghai)，isaperennialplantandbelongstothegenusStellerainthefamilyofThy

6、melaeaceae，whichistheauthenticmedicineofChinesetraditionalherbandalsoistheimportantmedicineofMongolianandTibetan．Itcanclearheat，relievetoxicity,cureswelling，purgefire，removethenecrotictissueorulcersandpromotegranulation．Inthisstudy,usingleavesofStellerac

7、hamaejasmeasmaterial，thecallusinductivityofdifferentconcentrationsof2，4-Dwasstudiedandtheoptimalconcentrationof2，4-Dforcallusinductionwasfound．Withgrowthdynamicsofthecellproliferation，theappropriateinoculumwasdetermined．Andthenwefocusedontheeffectofauxin

8、andcytokininonproliferationofcallusculture，SOthebesttrainingformulawasobtained．Thetotalflavonoidscontentinthecalluswasmeasuredwithcolorimetryandtheeffectofauxinandcytokininontheaccumulationoftotalflavonoidsinthecalluswasan