鸡舍环境中镰孢菌的种类及真菌毒素检测.pdf

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1、9鸡合环境中镰孢菌的种类及真菌毒素检测作者姓名：学科、专业：研究方向：导师姓名：欧阳毅微生物学真菌分类与资源利用吕国忠教授王雅玲教授2011年05月』IIIIII111Iil111IIIll{Y1890969}究成果。论文中除特别加以标注和果，其他同志的研究成果对本人的学位论文作者签名：丝蟹整学位论文版权的使用授权书本学位论文作者完全了解辽宁师范大学有关保留、使用学位论文的规定，及学校有权保留并向国家有关部门或机构送交复印件或磁盘，允许论文被查阅和借阅。本文授权辽宁师范大学，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库并进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编

2、学位论文，并且本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。保密的学位论文在解密后使用本授权书。学位论文作者签名：j蕴罩虹指导教师签名：签名日期：％讽够。％年月日婷，r’．二．P．’．·譬●．●辽宁师范大学硕士学位论文摘要本研究利用tri5特征性引物对分离自包括空气、饲料、土壤、积尘和饮用水在内的鸡舍环境基质中的镰孢菌分离株基因组DNA扩增来快速筛选产毒镰孢菌，并通过正交试验设计方法对tri5阳性菌株进行产毒培养，采用免疫亲和柱净化．高效液相色谱(HPLC)方法对产毒培养产物和鸡舍空气及基质样品进行T．2毒素和HT．2毒素进行定性和定量分析，明确T．2毒素和产毒镰孢菌的数量关系

3、，在建立空气和周围基质之间镰孢菌—产毒镰孢菌—．T-2和HT．2毒素量化关系的基础上，初步探明鸡舍气载镰孢菌及T．2毒素的发生规律，为人类和动物气传真菌病的预防和控制提供理论依据。分别在2009年11月和2010年4月采集鸡舍空气样品19份，基质(包括土壤、积尘、饲料、饮用水)样品共164份。对lO份空气样品和40份基质样品中的镰孢菌进行分离鉴定，得到来自空气中的59株和来自其他基质中的80株共139株镰孢菌分离株，其中拟轮枝镰孢和半裸镰孢为优势菌种，所占比例分别为23．74％和17．26％。不同类型基质中，土壤中的镰孢菌浓度最高；不同类型鸡舍中，种鸡舍中获得的镰孢菌分离株

4、最多。tri5．PCR对139株镰孢菌分离株的基因组DNA进行特异性扩增，得到42株tri5+镰孢菌，其中tri5+菌株数量最多的镰孢菌种类为禾谷镰孢菌，土壤中分离筛选的tri5+镰孢菌的比例最高。对空气中得到的10株tri5+镰孢菌按照40号Fsemitectum的最佳产毒培养条件进行产毒培养，HPLC检测培养产物，7株镰孢菌产生T．2毒素，浓度范围为1．3ng／mL～5ng／mL，3株产生了HT．2毒素，浓度最高为17．1ng／mL。按照国家检验检疫局质量检测标准，采用免疫亲和柱净化．高效液相色谱方法检测鸡舍环境基质中的T．2毒素(包括HT．2毒素)、黄曲霉毒素(AF)

5、、玉米赤霉烯酮(ZEA)和赭曲霉毒素A(OTA)。检测结果表明，所有环境基质中均检测到T．2毒素，以土壤中的毒素浓度最高，为2199／kg，除饲料以外的基质中未检测到OTA和ZEA的存在，，饲料中的OTA和ZEA水平在冬季和春季有明显差异，冬季与春季饲料样品中的ZEA浓度具有显著差异(P

6、5wereusedtoamplifygenomicDNAinordertorapidlyidentifythetoxogenicFusariumstrains，whichwereisolatedfromtheair，feed，soil，dustandwatersampledfrompoultryhouses．Theconditionoftoxogenicculturewasinvestigatedbyorthogonaldesignmethod．QuantitativedetectionofT-2toxin(HT．2toxin)wasconductedintoxogenic

7、cultureproductandthesamplesfrompoultryhousesbyimmunoaffinitycolumncleanandhi曲performanceliquidchromatography(HPLC)．ThequantitativerelationshipofT．2toxinandtoxogenicFusariumstrainsWasanalyzed,andtheirrelationshipwi廿1Fusariumstrainsfrompoultryhouseswassetupintoa