生化基础知识-比色法.ppt

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1、比色法原理(分光光度法)多么美丽五彩斑斓的春天啊为什么上述溶液呈现不同的颜色?自然光-赤橙黄绿青蓝紫波长决定颜色光谱-连续不同波长光的集合物质对不同波长光的选择性吸收由于物质对不同波长光的选择性吸收而引起,物质呈现的是被吸收颜色的互补色。单色光互补光复色光现在知道她的秘密了吗?脑筋急转弯1、红光照射红色溶液,看透过什么色?2、红光照射绿色溶液,看透过什么色?透光度(透射比)Transmittance透光度定义:T取值为0.0%~100.0%全部吸收T=0.0%全部透过T=100.0%吸光度定义:T、A与颜色的关系------------

2、---------透光率(T)吸光度(A)---------------------10.0000.750.1250.50.3010.250.6020.170.7700.11.0000.051.3010.012.0000.0013.000---------------------?测量物质光吸收的装置-比色计比色计或分光光度计物质的光吸收曲线-定性分析吸光度与光径的关系吸光度与浓度的关系朗伯-比尔定律:A=-lgT=KCL透光度(transmittance,T,透射率)T=It/I0吸光度(absorbance,A)光密度(optica

3、ldensity,D或OD)A=-lgT=lgI0/ItLamb-beer定律:A=KCLK为吸光系数,C为浓度,L为光径cm摩尔吸光系数ε:当C=1mol/L,L=1cm,A=ε比色定量——与标准浓度物质溶液比较目视比色法观察方向空白c1c2c3c4比色计或分光光度计比色法成立的基础有色或有吸收单色光

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