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时间:2020-03-26
《毛细管电泳法检测结核杆菌蛋白多肽类抗原活性成分研究.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第26卷第lO期化学研究与应用Vo1.26,No.102014年l0月ChemicalResearchandApplicationOct.,2014文章编号:1004—1656(2014)10.1545-06毛细管电泳法检测结核杆菌蛋白多肽类抗原活性成分研究张晖,薛洪宝,陈勇,李柏青2,梁丽丽,陶兆林(1.蚌埠医学院化学教研室,安徽蚌埠233030;2.蚌埠医学院感染与免疫安徽省重点实验室,安徽蚌埠233030)摘要:采用毛细管电泳法分离检测结核杆菌耐热抗原样品中的活性成分。熔融石英毛细管55cm(40cm处检测窗口)x
2、50i.d.;缓冲液:0.15tool·L硼酸盐(含5g·L~PEG-4000,pH=10.92);分离电压:+12kV;进样压力:O.5psi(3.45kPa),进样时间3.0s;分离温度:25~C;UV-Vis检测器检测波长:200nm。本方法能分离溶菌酶标准蛋白和牛血清白蛋白标准品,根据分子量大小能有效分离结核杆菌耐热抗原样品活性成分,线性回归方程相关系数r2在0.99673以上,定量限在l9.47g·mL左右。样品加标回收率在96.09%左右,相对标准偏差小于8.13%,本方法与快速蛋白液相色谱法结果一致。该方法
3、简便、灵敏、快速、可靠、重现性好,能用于结核杆菌耐热抗原样品中活性成分测定。关键词:毛细管电泳法(CE);结核杆菌耐热抗原(Mtb-Ag);活性成分;快速蛋白液相色谱法(FPLC)中图分类号:0657.8文献标志码:ADeterminationofactiveingredientsinMycobacteriumtuberculosisantigenpepRtidebycapfiillarye’l‘ect‘ropn。orest‘sZHANGHui,XUEHong—bao‘,CHENYongzLIBai—qingzLIANG
4、Li-liTAOZhao—lin,,(1.DepartmentofChemistry,BengbuMedicalCollege,Bengbu233030,China;2.AnhuiKeyLaboratoryofInfectionandImmuni~,BengbuMedicalCollege,Bengbu233030,China)Abstract:Asimplecapillaryelectrophoresis(CE)methodwasestablishedfortheanalysisofactiveingredientsi
5、nmycobacteriumtu-berculosisheat.resistantpeptideantigen(Mth.Ag).TheanalyseswerecarriedoutonanP/ACETMMDQcapillaryelectrophoresissystem(BeckmanCoulter,USA)equippedwithanUV—Visdetector.Separationwasperformedinabarefused-silicacapillarywhichwas55.0cmlong(40.0emtothed
6、etector,50p,mi.d.)at20~C,anda0.15mol·Lboratesolution(containing5g‘L~PEG-4000,pH=10.92)wasusedasbackgroundelectrolyte.Thesampleswereintroducedintothecapillaryunderapressureof0.5psi(3.45kPa)for3S,andtheseparationvoltageWassetat+12kV.ThedetectionwavelengthWasfixedat
7、200am.Inthisapproach,standardlysozymeandbovineserumalbumincouldnotbeonlyseparatedefectively,butalsoseveralactiveingredientsseparatedfromMtb-Agbasicallyaccordingtothemolecularweight.Thelinearregressionequationcorrelationcoefficientfor2kindsofstandardsamplesWasabov
8、e0.99673.TheQuantificationlimitof2kindsofstandardsampleswasabout19.47Ixg·mL~.Thespikedrecoverieswere96.09%orso,andtherelativestandarddeviationWaskeptwithin8.13
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