植物组织培养常见问题及对策.doc

《植物组织培养常见问题及对策.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、植物组织培养常见问题及对策摘要：本文从植物组织培养中常见的问题污染、玻璃化、褐化、生根难、炼苗难等问题进行阐述，并提出相应的解决办法，为以后的组培奠定基础。关键词：组织培养；问题；对策PlanttissueculturecommonproblemsandcountermeasuresAbstract:thisarticlefromtheplanttissuecultureofcommonproblempollutionvitrificationBrowningtriedhardtotakerootseedlingspaperdescribesproblems,andputsforwar

2、dthecorrespondingsolutionsforthefutureoftissue,laythefoundationKeywords:tissueculture;Problem;countermeasures引言植物组织培养技术，作为现代生物技术的一个重要手段，已在工厂化育苗、种苗脱毒复壮、遗传育种、种质资源的保存与交换等领域得到了广泛应用。在近几年开展植物组培快繁技术研究和生产过程中，发现有几个问题较常见，有时会严重影响工作效率和进展，降低组培快繁的经济效益。现将这些问题及解决对策总结如下。1污染组织培养是在无菌条件下进行的，在培养过程中若有微生物污染，组培将无法进行。对于

3、工厂化育苗来说，污染往往是影响生产任务按时完成的主要原因。1．1产生污染的因素1．1．1外植体通常多年生的木本材料比1—2年生的草本材料带菌多；老的材料比嫩的带菌多；田间生长的材料比温室的带菌多；带泥土的材料比清洁的带菌多。18中以雨季的材料带菌多，1d中以中午阳光最强时的材料带菌少。1．1．2培养基高压蒸汽灭菌的温度、压力、时间和正确使用情况，以及过滤灭菌中过滤膜孔径、过滤灭菌器械的灭菌处理、过滤灭菌操作等均影响培养基的灭菌效果。1．1．3操作环节接种室是否清洁、干燥、密封，是否经常用紫外线灯照射、甲醛熏蒸、70％酒精喷雾杀菌等，操作是否熟练。1．1．4培养环境培养室要求清洁、密闭，

4、每天用70％酒精喷雾除菌、降尘，每周用少量甲醛熏蒸灭菌，如有空气过滤装置效果更好。培养室相对湿度太高时，污染加重。1．2防止和克服污染的措施1．2．1接菌室的灭菌在每次接种前半个小时，用20％的新洁尔擦洗室内设备、工作台面，再用紫外线灯照射20min。使用前还可以喷洒70％的乙醇，使空气中灰尘迅速下降。在进行组培时。除了培养基、接种材料、器皿和用具保证无菌外，同时在接种时还需要严格进行无菌操作[8]。1．2．2植物材料的选择及防止污染由于不同的植物材料品种，不同的取材部位、取材大小、取材年龄以及取材肘期，其带菌量不同，为此在取材时应仔细选择，以减少污染的发生[4]。一般在春季采集生长健

5、壮的材料为佳，在连续晴天的中午取材，选取洁净、生长旺盛的部位，现取现灭菌。以木本植物为培养材料时，要采取一些预防措施，尽量避免材料带菌。如外植体生长环境较脏，可在室内或无菌条件下对枝条进行液体培养催芽，即用刷子沾少量的洗衣粉或肥皂稀溶液把枝条刷洗干净，进行水培或者液体培养，选择新抽生的嫩枝或者嫩芽作为外植体，可降低污染率。或者在无菌条件下对采自田间的枝条进行暗培养，待抽出徒长的黄化枝条时取材，可有效减少污染。2玻璃化2．1玻璃化苗的特征和危害在进行组织培养时，经常会发现试管苗生长异常，表现为试管苗叶、嫩梢水渍状或呈水晶状透明或半透明；整个植株矮小肿胀、失绿；叶片皱缩成纵向卷曲，脆弱易碎

6、。这种现象称为“玻璃化”，这种苗称为玻璃化苗[8]。玻璃化苗中因体内含水量高，干物质、叶绿素、蛋白质、纤维素和木质素含量低，角质层、栅栏组织等发育不全，表现为光合能力和酶活性降低、组织畸形、器官功能不全、分化能力降低、生根困难、移栽后很难成活。玻璃化苗在植物组培中很普遍，有时多达50％以上，严重影响繁殖率，造成人、财、物的极大浪费。2．2玻璃化苗的成因琼脂和蔗糖浓度与玻璃化苗的比例呈负相关，琼脂或蔗糖浓度越高，玻璃化苗的比率越低。培养基的水势影响玻璃苗的形成，液体培养是导致玻璃化的主要原因，只要降低培养容器的相对湿度，就可以降低玻璃化苗的比例，试管苗玻璃化可能是培养材料对培养基内水分状

7、态不适应的一种生理变态。培养基中BA浓度和培养温度与玻璃化呈正相关，乙烯对玻璃化的影响，与改变组织的生理生化及纤维结构有关。玻璃化苗也是培养瓶内气体与外界交换不畅造成的，密闭的封口材料是导致玻璃化的原因之一。2．3防止和克服玻璃化苗的措施2．3．1增加培养基硬度在固体培养时，适当增加琼脂的浓度，并提高琼脂的纯度，都可增加培养基的硬度，从而造成细胞吸水阻遏，降低玻璃化。2．3．2适当提高蔗糖浓度提高培养基的糖浓度，可提高渗透压，降低培养基的渗透势