蚕丝丝胶蛋白及其水解产物的抗氧化性能研究.pdf

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1、108江西化工2014年第1期蚕丝丝胶蛋白及其水解产物的抗氧化性能研究赵林朱义旺谢艳招陈文明(福建师范大学闽南科技学院应用化学研究所，福建泉州362332)摘要：以蚕丝为原材料，在不同温度和压力下对蚕丝进行脱胶处理。并用邻苯三酚自氧化法测定各组脱胶液的抗氧化能力。选取抗氧化性能最强的一组脱胶液用高温高压碱法进行水解，得到丝胶多肽水解液，同样考察了水解液的抗氧化性能。结果显示高温高压脱胶的最佳工艺条件为：反应温度100oC，脱胶时间60min。最佳水解条件为：温度120，pH=11，时间4h。实验结果还显示在0．5—3．0m

2、L范围内，加样量对脱胶样品的氧自由基清除率有明显影响，当加样量为3mL时，其氧自由基清除率可达66．67％。关键词：丝胶蛋白邻苯三酚自氧化水解生物体在新陈代谢的过程中，体内不断产生多种件的高温高压水脱胶处理得到不同丝胶蛋白，并通过自由基，其中尤以氧自由基最多。它们是需氧生物有氧其对邻苯三酚自氧化产生的超氧阴离子清除能力的测呼吸的产物J。正常情况下，生物体内产生的活性氧定，优选出最佳处理工艺，并用高温高压碱法水解得到自由基能够被其体内的抗氧化防御系统有效清除，同丝胶多肽，并研究了其抗氧化性能。时使受自由基损伤的生物大分子，在

3、监视和修复系统1材料与方法的作用下得以改正，即使还剩下未被很好修复的细胞，1．1实验材料、试剂和仪器也可通过凋亡由吞噬细胞清除，维持了自由基生成与1．1．1材料与试剂清除的动态平衡】。但在病态情况下，或者随着年龄蚕丝(购于杭州)，焦性没食子酸(分析纯，汕头市的增长，体内的自由基将会进一步增多，活性氧自由基西陇化工厂)；-羟甲基氨基甲烷Tris(分析纯，国药集的产生和清除平衡可能被打破，过量的活性氧自由基团化学试剂有限公司)；盐酸(分析纯，汕头市西陇化工则可能对生物体内的生物大分子如细胞膜、蛋白质、酶厂)。和DNA等造成损伤

4、，影响机体健康，导致诸如癌症、高l_1．2仪器血压和糖尿病等疾病的产生。YXQ—LS一Ⅱ式压力灭菌器(上海博迅实业有限已经有许多研究证实，蛋白质水解后生成的多种责任公司医疗设备厂)、DHG一9140A型电热恒温鼓风物质具有抗氧化功能，对活性氧自由基有一定的清除干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)、电子精密天平作用。丝胶蛋白是天然蚕丝的主要成分之一，其被覆PL203(梅特勒一托利多器有限公司)、漩涡振荡器H在丝素外部的胶质物质即丝胶蛋白，占总重量的25％，一101(上海康禾光电仪器有限公司)、uV一2100紫外己在高级化妆品、

5、医用生物材料和表面活性改性材料分光光度计(上海尤尼柯仪器限公司)、荣华HH一4等方面得到广泛应用。早在1998年，日本山田英幸等数显恒温水浴锅(江苏省金坛市朱，匕仪器制造有限公就报道过丝胶蛋白具有抑制脂质过氧化和酪氨酸酶活司)漩溽振荡器H一101(上海康禾光电仪器有限公性的作用】。国内周丽霞利用家蚕茧壳经过高温高司)、pH211哈纳pH计(北京哈纳科技有限公司)、电子压水脱胶处理后，分离和纯化了5种不同蚕茧品种的万用炉(天津市泰斯特仪器有限公司)。丝胶蛋白并对已纯化丝胶样品的体外生物活性如抗氧1．2实验方法化、抑制酪氨酸酶

6、活性和抑制a一葡萄糖糖营酶活性进1．2．1高温高压脱胶法制备蚕丝丝胶液行分析，结果表明，分离纯化的丝胶蛋白均具有一定清将蚕丝洗净，除去杂质和尘埃，称取3克蚕丝置于除自由基、抑制黑色素生成的作用。相人丽将蚕丝干净锥形瓶中，以浴比1：25置于立式压力蒸汽灭菌器经过高温高压水脱胶处理、高温高压碱性水脱胶处理中。锥形瓶瓶口用棉花塞紧，设定一定时间及温度，反和中性蛋白酶水解后，制成了6种小同分子量范围的应后将脱胶液转入碘量瓶中，待冷却后放人冰箱4℃保丝胶肽及其水解物，研究表明6种丝胶肽均具有抑制存备用。脱胶时间及温度设计如表1所示：

7、黑色素生成的作用。本文以蚕丝为原料，经过不同条2014年3月蚕丝丝胶蛋白及其水解产物的抗氧化性能研究lO9表1蚕丝脱胶处理条件水平表脱胶液编号设置参数l23456789时间(min)1030601O30。60103060温度(℃)10010o1ool10ll01101201201201．2．2清除自由基(0·)能力测定A是脱胶液不加邻苯三酚的吸光度值；邻苯三酚在弱碱条件下发生自氧化反应产生OA，是邻苯三酚不加脱胶液的吸光度值。·1．2．3不同丝胶蛋白加样量对其抗氧化性能的，0·清除剂能使邻苯三酚自氧化产物在320nm处的吸

8、收峰受到抑制。因此可通过测定A铷值来评价清影响实验除剂对O·的清除能力。本实验参照邻苯三酚自氧如表2所示，取7只25mL的锥形瓶，各加入4mL化法J：取4mLpH为8．2、浓度0．05mol／L的T6s—pH为8．2的"Iris—HCI(0．05mol／L)缓冲液，再分别加HC1缓冲液于碘量瓶中，再加入