表面活性剂和染料探针共振光散射法测定蛋白质.pdf

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1、第24卷第11期化学研究与应用Vo1.24,No.112012年11月ChemicalResearchandApplicationNov.,2012文章编号:1004-1656(2012)11—1624-05表面活性剂和染料探针共振光散射法测定蛋白质张亚南,冯素玲(河南师范大学化学与环境科学学院,河南新乡453007)摘要:在pH为2.1的Britton.Robinson缓冲溶液中,蛋白质与十二烷基磺酸钠和吖啶红作用形成聚集体,导致体系产生较大的共振散射光(RLS)强度,并且RIS的增强程度与蛋白质的浓度呈线性关系,据此建立了测定蛋白质含量的方法。人血清白蛋白(HSA

2、)和牛血清白蛋白(BSA)分别在0.03—3.0txg/mL和0.2—7.0g/mL的浓度范围内与增强的共振光散射强度有良好的线性关系,相应的检测限分别为0.0l19~g/mL和0.026p.g/mL。对体系的反应机理进行了讨论。将方法用于人血清中蛋白质含量的测定,并将分析结果与考马斯亮蓝法进行了对照。t检验证明,两种方法无显著性差异。关键词:共振光散射;吖啶红;十二烷基磺酸钠;蛋白质中图分类号:0657.3文献标识码:ADeterminationofproteinwithsurfactantanddyeprobebyresonancelightscatteringt

3、echniqueZHANGYa—nan,FENGSu—ling’(CollegeofChemistryandEnvironmentalScience,HenanNormalUniversity,Xinxiang453007,China)Abstract:ItisfoundthatsodiumdodecylsulfonateandacridineredcombinewithproteintoformanaggregateatpH2.10.Itresultsinasignificantenhancementoftheresonancelightscattering(RLS

4、),andtheenhancementdegreeofRLSislinearwiththeconcen·trationofprotein.Basedonit,amethodfordeterminationofproteinhasbeendeveloped,diferentproteinsandtheenhancementofRI~havegoodlinearrelationshipintherangeof0.030~3.0g/mLforhumanserumalbumin,0.20—7.0g/mLforbovineserumalbumin.thecorrespondin

5、gdetectionlimitsare0.O1191xg/mL和0.026~g/mLrespectively.Thereactionmechanismofsystemisdiscussed.Themethodisusedforanalyzingproteininhumanserum,andthedetectionresultsarecomparedwiththoseofCoomassiebrilliantbluemethod,therearenosignificantdifierencesbetweentwomethodsaccordingtothet-tesLKey

6、words:resonancelightscattering;acridinered;sodiumdodecylsulfonate;protein蛋白质检测技术的发展在许多领域都有重要在蛋白质的分析方法中,广泛使用共振光散意义,如生命科学、临床医药、生化分析和食品质射探针m和荧光探针.4实现蛋白质的检测。量检测领域。检测蛋白的常规方法有Lowry法¨其中张爱梅等¨叫在柠檬酸一NaOH缓冲溶液中,和Bradford分析法l2],但这两种方法灵敏度低,不基于十二烷基磺酸钠增强吖啶红-蛋白质体系的共能满足痕量蛋白质的检测。随着各项技术的发振光散射强度,建立了测定蛋白质的分析

7、方法;但展,又出现了一些测定蛋白质的新方法,如:荧光对反应机理的讨论尚不深入。陈鸿琪l4等在Tris—分析法【3.4]、色谱法]、化学发光法以及共振光HC1缓冲溶液中,根据蛋白质能影响十二烷基磺散射法rm]。其中有些方法仍存在一些缺点:灵敏酸钠对吖啶红的自聚平衡的调节,提出了荧光法度较低J、分析时间较长J、操作复杂J。测定蛋白质的方法。本文基于在Britton.Robinson收稿日期:2012-01-17;修回日期:2012~3-31联系人简介:冯素玲(1963.),女,教授,博士,主要研究方向分子光谱。E—mail:slfeng@htu.el第1

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