从肝素生产废弃物中分离纯化硫酸皮肤素及其功能性评价.pdf

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1、PurificationandfunctionalevaluationofderrnatansulfatefromthewasteinheparinproductionBv√AuthorGUORUiUndertheSupervisionofProfessorCaoYanpingSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsFortheMaster’SDegreeSchoolofFoodandChemicalEngineeringBeijingTechnologyandBusinessUniversityJun

2、e20ll学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作所取得的研究成果。除了文中已经注明引用的内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律后果完全由本人承担。作者签名：姬日期：加{『年r月，，日学位论文授权使用声明本人完全了解北京工商大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间学位论文所涉及的知识产权属于北京工商大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以

3、公布学位论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后遵守此规定)学位论文电子版同意提交后，可于团当年口一年口二年后在学校图书馆网站上发布，供校内师生浏览。日期：沙r1年歹月，／日摘要硫酸皮肤素(Dermatansulfate，DS)是动物机体内一种重要的黏多糖，本文旨在研究从肝素生产废弃物中分离纯化DS的方法，并对其抗氧化与护肤作用进行评价。本文采用sevag法、凝胶过滤层析法、CPC西吡氯铵法、有机试剂分级沉淀结合弱阴离子交换色谱法对肝素生产废弃物中的DS进行纯化，筛选了乙醇、丙醇、丙酮三种沉淀剂进

4、行分级沉淀。结果显示sevag法、凝胶过滤层析法和CPC西吡氯铵法的纯化效果较差。沉淀剂筛选时通过对各沉淀级分的醋酸纤维素薄膜电泳结果进行分析，发现丙酮法效果最好，级分14与15中DS含量占三种黏多糖组分的100％，随后通过DEAE．650S弱离子交换层析进一步分离，样品经红外光谱(IR)与核磁共振(NMR)鉴定、高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定纯度，证明得到了高纯度的DS，产品纯度为94．29％，相对于未处理原料的提取率为1．91％。利用硫酸软骨素ABC酶将DS样品酶解，强阴离子交换高效液相色谱(SAX．HPLC)对酶解所得二糖检测，结果表明样品D

5、S主要二糖重复单元为2．乙酰氨基．2一脱氧一3．O．4一O一磺基．D一半乳糖(△di．4S)，还含有少量的2．乙酰氨基．2．脱氧_3_．0．D．半乳糖(Adi．0S)和2．乙酰氨基．2．脱氧．3．0．6．0．磺基．D．半乳糖(△di．6S)，三种不饱和二糖△di．0S、△di．6S和△di．4S的摩尔比为1．0：1822．5：62707．2，进一步验证该样品为DS而非其它黏多糖。高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定样品DS的分子量为80220。研究了用于评价羟基自由基清除能力的Fenton-罗丹明B反应体系中H202浓度、FeS04浓度、H2S04浓度对

6、体系稳定时间的影响并修正反应条件，评价了样品DS对羟基自由基的清除能力并与抗坏血酸(Vc)进行对比，两者的半抑制浓度Ic50分别为0．2889／L与0．1999／L。修正了用于评价超氧阴离子自由基清除能力的邻苯三酚体系的反应条件，评价了样品DS清除超氧阴离子自由基能力并与超氧化物歧化酶(SoD)对比，两者的半抑制浓度IC50分别为0．1219／L与0．0179／L。利用Corneometer体内法分别对不同浓度的DS和硫酸软骨素(CS)配方睹喱进行了皮肤保湿功效评价，并与透明质酸(HA)的保湿效果进行比对。结果表明在涂抹0．05％DS、0．I％DS、0．

7、3％DS配方睹喱4h内，志愿者皮肤水分含量平均值增加明显(10<0．05)，皮肤水合率分别上升至37．85％、42．25％和44．90％，表明该浓度下DS保湿效果明显，且优于HA；而涂抹0．05％CS、0．I％CS、0．3％CS配方暗喱4h内，志愿者皮肤水分含量平均值增加明显(p<0．05)，表明该浓度下CS保湿效果明显，皮肤水合率分别上升至37．72％、41．79％#1144．65％，且优于HA。DS与CS相比使用后皮肤水合率变化差异性不明显，因此两者保湿效果差异不明显。采用人体皮肤丹磺酰氯染色法，评价了DS和CS配方乳液对促进皮肤角质代谢(剥脱)的效

8、果。结果表明每日两次涂抹含0．5％DS乳液与每日两次涂抹含0．5％CS乳液部位的