申报国家自然科学基金提纲.pdf

《申报国家自然科学基金提纲.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、报告正文(本提纲只适用于面上项目，可自行增加栏目，请撰写完毕后删除无关的信息。其他类型的项目请参照相关正文报告撰写提纲。)（一）立项依据与研究内容（4000-8000字）：1、项目的立项依据（附主要的参考文献目录）。恶性肿瘤目前仍然是威胁人类生命的第二号杀手，化学治疗虽能降低癌症死亡率，但现有的抗肿瘤药具有杀伤肿瘤细胞的同时对正常细胞也有较大的杀伤性副作用。因此，研制新的具有高度选择性的抗肿瘤药，是有效控制恶性肿瘤的迫切需要。蛇毒是一类有酶活性和其他生物活性的蛋白质和多肽的混合物。一般认为蛇毒含有多种酶类、特殊药理活性

2、的组分、生物活性因子及一些糖类(半乳糖、2+2++甘露糖等)、唾液酸以及一些离子如Ca,Mg,Na等。有关蛇毒及其有效组分抗癌的研究在国内外都早已开展，蛇毒或其初步提取物通过注射途径具有抗癌作用的研究国内外报道较多，但由于蛇毒中成分复杂，直接注射给药有可能对机体产生严重毒副反应而限制了其临床应用。目前，研究并提取其中具有抗肿瘤作用的有效成分用于肿瘤治疗是目前的热点之一。近年来国内外学者从多种蛇毒中分离出一些具有抗肿瘤作用的有效成分，如能破坏肿瘤细胞粘附连接蛋白，阻止肿瘤细胞的粘附和转移的解离素[1-3][4]（disi

3、ntegrin）、凝集素BjcuL，诱导白血病细胞凋亡的中华眼镜蛇毒组分[5][6]C(主要成分是膜毒素)和L-氨基酸氧化酶等。另外，国内外也有用眼镜蛇[7-8]毒组分与单抗偶联导向性杀伤肿瘤细胞的研究。上述研究虽然均获得了不同程度的抗肿瘤有效组分，但多有以下不足之处：1.它们都是蛇毒中原始存在的天然组分，这些原始存在的组分作用比较复杂，多具有不同表现的毒性反应，直接用于人体风险较大，目前尚难于在临床上应用和推广。2.大部分组分的作用是阻止肿瘤细胞的粘附和转移，它们对已经存在的肿瘤细胞杀伤作用不明显。3.偶联物易于在体

4、内迅速解体，导致眼镜蛇毒组分脱落失效，或因分子较大不易进入实体瘤内部，以及目前缺乏对人类肿瘤细胞亲和力强的单抗等原因，眼镜蛇毒组分与单抗偶联导向性杀伤肿瘤细胞的方法对人类肿瘤，特别是实体瘤的疗效不确切，目前尚难用于临床。因此，需要通过新的研究途径解决这些问题。我校杨冠群教授等发现眼镜蛇毒通过口服途径在动物实验中有明显抗癌[9]作用。经临床试用，与其它抗癌措施可产生良好的协同作用，大大提高疗效，[10]延长病人生存期，降低死亡率。这结果给予我们很大的启示：眼镜蛇毒中具有生物活性的组分多为蛋白质类物质，经口服给药后，这些蛋

5、白质经过胃肠道内消化酶的消化或肝内首关消除后，很可能主要以小分子消化产物的形式进入体内循环，眼镜蛇毒的原有主要毒性将显著降低，而它仍然保留了抗癌活性；因此，如果以动物口服眼镜蛇毒后消化吸收产物中的抗癌有效组分作为研究目标，极有可能显著减轻其毒副作用。此外，我们的初步研究结果（见后节）证明其作用为直接抑制癌细胞的增殖并诱导癌细胞凋亡，对肿瘤细胞杀伤作用明显。同时，由于消化吸收产物的分子变小，更易进入实体瘤内部和跨膜进入肿瘤细胞，有利于充分发挥其药理作用。因此，本课题的研究比上述对蛇毒中原始存在抗癌组分的研究有着更大的研究

6、价值和应用前景。由于蛇毒口服后其体内过程极为复杂，在现有条件下极难在体外准确地模拟蛇毒在体内消化吸收和首关消除等从胃肠道进入血液循环的过程，要想寻找其有效组分，最快捷的方法是用口服蛇毒后的动物血清作为研究对象。我们的初步研究发现口服1～5天眼镜蛇毒后的动物血清对人类多种肿瘤细胞(包括肝癌HpeG2细胞、鼻咽癌CNE-2细胞、白血病HL-60细胞及肺腺癌细胞)确能产生明显的细胞毒作用，可使肿瘤细胞生存率明显下降，癌细胞的分裂指数也有明显下降(p<0.01)；对增殖迅速的人胚肺成纤维细胞却没有明显的细胞毒作用[11-14]

7、，表明它具有选择性抑制肿瘤细胞增殖的作用。此外，它还以剂量依赖方式诱导人肝癌细胞HepG2细胞的凋亡，诱导凋亡的机制可能与c-jun,c-myc基[15]因的表达上调有关。表明口服眼镜蛇毒的消化产物确有明显抗癌作用，且对正常的增殖细胞无明显细胞毒作用。在此基础上，我们分别用眼镜蛇毒原毒、上述动物血清和经强酸及加热处理后的眼镜蛇毒在昆明种小鼠作对移植性腹水型肝癌的在体抑瘤试验，连续灌胃10天，均明显抑制肿瘤增殖（抑瘤率均大于30%），经流式细胞仪测定，肿瘤细胞凋亡率均在20%以上（生理盐水组为2.3%），组织学HE和TU

8、NEL染色检查表明给药组的瘤块发生明显的坏死和凋亡，证明眼镜蛇毒蛋白变性或水解后的产物仍然保持了其抗肿瘤活性。我们的上述研究成果经查新为独家发现，已申报国家发明专利。但由于蛇毒因产地、采集季节不同，其组成成分在数量和质量上有较大区别，难于保证制剂的质量，加上其有效组分和作用机制不明，其他非有效组分难免保留一定的毒性，不利于在临床推