高效液相色谱法测定发酵液中色氨酸和酪氨酸含量的研究.pdf

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1、⋯第40卷，第1期安徽化工Vo1．40，No．1o2014年2月ANHUICHEMICALINDUSTRYFeb．2014·分析测试·高效液相色谱法测定发酵液中色氨酸和酪氨酸含量的研究纪传侠(安徽丰原集团发酵技术工程研究有限公司，安徽蚌埠233010)摘要：建立了高效液相色谱法测定发酵液中色氨酸和酪氨酸含量的方法。采用AgilentC18柱(250mm×4．6ram，5m)，以0．1inol／[醋酸钠(pH4．0±0．05)一甲醇(90：10)为流动相，流速为1．0mL·rain，紫外检测器的检测波长为280nm，柱温30℃，结果显示，色氨酸的线性范同为50～500g·mI

2、～，相关系数为r=0．9985，平均回收率为99．3％(n=4)；酪氨酸的线性范围为20～2000g·mL一，相关系数为r=0．9991，平均刚收率为1O0．2％(n=4)。该方法无需衍生，直接测定，简便，准确，用于发酵液中色氨酸和酪氨酸含量的测定，结果令人满意。关键词：高效液相色谱；发酵液；色氨酸；酪氨酸doi：10．3969~．issn．1008-553X．2014．01．024中图分类号：0657．72文献标识码：A文章编号：1008—553X(2014)01—0068—03酪氨酸(Tyr)是人体的非必需氨基酸，色氨酸(Trp)2_2对照溶液的配制是人体内必不可少的氨

3、基酸之一，参与人体蛋白质的合精密称取酪氨酸对照品0．0200g和色氨酸对照品成和代谢，在人体神经系统中发挥着重要的作用。色氨0．2000g，用去离子水溶解，定容至100mL，制成氨基酸标酸在医药、食品和饲料添加剂方面有着广泛的用途。由样的储备液，此溶液现用现配。于它在从天然蛋白质中提取来源有限，而化学合成代价2．3样品的处理较高，因此一般采用发酵法来生产色氨酸。发酵液中色取lmL发酵液于100mL容量瓶中，用去离子水溶氨酸和酪氨酸的测定是发酵法生产色氨酸不可缺少的解定容至刻度，摇匀后置于10mL刻度离心管中，在步骤，其定性和定量测定方法有纸层析法、薄层分析、比3000～40

4、00dmin的速度下离心5min，取上清液通过色法lJ_引，但是高效液相色谱法更能准确检测酪氨酸和色0．221TI滤膜至进样瓶，高效液相测定。发酵液色谱图氨酸的含量。国家标准方法中氨基酸的测定是经氨基酸见图l。分析柱后衍生检测的方法l，此方法避免了采用昂贵的氨基酸衍生试剂，待测液直接进样，可以快速准确检测发酵液中酪氨酸和色氨酸的含量，对发酵过程控制很有意义。1仪器与试剂Agilent高效液相色谱仪：1200液相色谱分离系统；自动进样器；紫外检测器。L一色氨酸对照品(SIGMA公司)；L一酪氨酸对照品(SIGMA公司)；甲醇(安徽时联特种溶剂有限公司，色谱1一酪氨酸：2一色氨

5、酸纯)；醋酸钠(宜兴第二化学试剂厂，分析纯)；冰乙酸(宜图1发酵液的色谱图兴第二化学试剂厂，分析纯)；水为去离子水。2方法与结果2．4系统适应性试验精密称取L—Tvr和L—Trp对照品约1Omg，用去离2．1色谱条件子水配制成约l【)【)g·mL的溶液，在上述色谱条件色谱柱：AgilentC18(250mmX4．6ram，51"13)；流动下，进样10L，记录色谱图。L-Tyr和L—Trp峰之间均j：日：0．hnol／L乙酸钠(pH4．0±0．05)一甲醇(90：10)；流达到基线分离(分离度>1．5)，理论塔板数以L-Trp计在速：1．OraL／rain；紫外检测器；检测

6、波长：280nm；柱温：2500以上。L—Tyr、L—Trp对照品溶液的色谱图见图2。30；进样量：10L。收稿￡j期：2013一l()一23作者简介：纪传伙(1977一)，女，程师，从事分析检测及质量管理工作，l3855296043，jichuanxia820@126㈣m。纪传侠：高效液相色谱法测定发酵液中色氨酸和酪氨酸含量的研究693讨论3．1检测波长的选择L—Tyr的特征吸收波长为(220，274)，由于在220nm下待测溶液中相邻杂质峰的干扰，所以其检测波长定至280nm。L—Trp的特征吸收波长为(219，279)，可以在210nm和280nm检测。为了同时检测L

7、—Tvr和L—Trp，检测波长应选择280nm。检测时采用安捷伦公司的二极管阵列检测器。1一酪氨酸：2一色氨酸图2对照品溶液的色谱图3．2流动相组成的选择改变流动相中甲醇的体积百分比(5％、10％、15％)，2．5检测限以标准溶液作为样品进行分析，色谱图显示，当甲醇体取L—Tvr和L-Trp对照品溶液(100IXg·mL-)稀释积分数为5％时，分析时间较长；而当甲醇体积分数为若干倍，进样l0L，记录L—Tyr和L—Trp峰高约为噪音15％时，分离效果不佳，故选择含体积分数为10％甲醇峰高的3倍时的色谱图，测得其最低