ASE-HPLC-MS∕MS法测定土壤中四环素类抗生素残留.pdf

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1、监测分析·MONITORINGASE—HPLC—MS／MS法测定土壤中四环素类抗生素残留孙宝利·，袁志华2，申秀丽1，贺小蔚1，李艳华1，赤杰1，仝乘风1(1．中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所侬业部农业环境与气候变化重点开放实验室，北京100081；2．农业部环境保护科研监测所，天津300191)摘要：通过优化ASE萃取参数和固相萃取净化条件，建立了土壤中4种四环素类抗生素残留的加速溶剂萃取一液相色谱串联质谱测定方法。选择EDTA—Mcllvaine：qa醇=1：2(VIV)作为萃取溶剂，应用Oasis—MAX强阴离子交换柱进行样品的富集和净化，乙腈：0．4％甲酸溶液=22：78(V／

2、V)条件下进行色谱分离，ESI正离子源和多反应监测模式(MRM)下测定，方法检测限为2．2～3．2嵋·kg_l，定量限为22-32txg·kg～，样品加标回收率在60．1％-103．8％之间，相对标准偏差为2．6％～4．8％。本方法具较高灵敏度和准确度，能满足土壤中斗g·kg‘1痕量水平4种四环素类抗生素残留测定要求。关键词：四环素；串联质谱；加速溶剂萃取文章编号：1005—4944(2013)01—0079—04随着我国城市和乡镇规模化养殖快速发展，含有抗生素的畜禽粪便年产出量在不断增加。由于相当数量的畜禽粪便没有经过综合处理而直接被施于农田，设施菜地中有机肥施用量占施肥总量的比重越来越高。

3、目前，抗生素污染问题已经被许多发达国家(如欧盟和美国)列为重要的环境问题，相关的基础研究正在迅速开展。四环素类药物是临床上使用最多、最广泛的一类抗生素，由于其具有水溶性较好、体内代谢后大部分以原形排出以及在环境中不易发生生物降解等特点，成为容易在环境中储存和蓄积的一类抗生素[1】。美国已经禁止在虾养殖中使用土霉素[21，意大利水产业将土霉素作为优先检测的化学品131。我国是四环素用量大国，土霉素产量占世界总产量的65％[41。四环素类抗生素以母体或代谢物的形式随尿或粪便排出体外的量可占抗生素用药量的40％～90％tz。可见。在国内外畜禽养殖大量使用四环素类抗生素的背景下，其对土壤的污染已经不容

4、忽视。与国外发达国家相比，我国抗生素的残留监测、风险评估工作还很薄弱，而目前四环素类抗生素的检测方法更多集中于畜禽养殖农产品、食物领域中删，急需高灵敏度、高选择性的土壤中四环素类抗生素残留检测方法。79农业环境与发震20}3年第j期土壤基质与食品基质差异较大，土壤含带有负电性的有机质及具有多孔隙的粘土矿物质，对四环素类抗生素具有较强吸附作用，这对土壤中四环素类抗生素的前处理方法提出更高要求。ASE(AccelerateSol—ventExtraction)技术是在高温、高压工作下提取目标物，通过提高目标物在溶剂中的溶解度，增加溶剂对基质的穿透力，来提高萃取效率，因而其广泛应用于土壤、底泥中有机

5、污染物的萃取[9-121。本文应用ASE技术，对其工作参数及固相萃取条件进行优化，建立了以EDTA—McIlvaine：甲醇=1：2(V／V)为萃取溶剂，采用MAX强阴离子交换固相萃取柱0．01mol·L‘1草酸甲醇洗脱来富集净化的前处理方法，应用HPLC—MS／MS串联质谱技术进行测定。与超声提取一高效液相色谱法测定土壤中四环素类抗生素残留方法【12】相比，灵敏度、选择性均有改善，而方法检测限达到卜g·kg。1痕量水平，回收率也提高到60．1％～103．8％，能够满足环境中痕量样品的分析。1实验部分1．1仪器与试剂Aglient1200液相色谱仪(美国Aglient公司)和AB3200Q串联

6、四极杆液质联用仪；反相C，。柱AglientSB监测分析·MONlTORINGKromasilCl8(2．1mmx100nlnl，3．5斗m)；ASE一250加速溶剂萃取仪(美国DIONEX公司)；KQ一700D数控超声仪；BuchiRotaryEvaporator—R215旋转蒸发仪；Oasis—HLB固相萃取柱和Oasis—WAX固相萃取柱(WATERS公司)。土霉素(oxytetracycline，OTC)、四环素(tetracy—cline，TC)、金霉素(chlortetracycline，CTC)及强力霉素(doxycycline，DC)均购自Fluka公司(美国)；甲醇、乙腈均为

7、色谱纯(Merk公司，美国)；Na2HPO。、柠檬酸、Na2EDTA、NaH2PO。为分析纯；草酸为优级纯。1．2标准溶液及缓冲溶液的配置准确称取0．1g的OTC、TC、CTC和DC标准品，加入少量甲醇溶解，然后转移到100mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释到刻度，配制成l000mg·L一的标准储备液，保存在4℃冰箱中备用。称取一定量的Na2EDTA、Na2HP04和柠檬酸，分别配制成0．1、0．2和0