SD大鼠睾丸支持细胞的分离、培养、纯化及鉴定.pdf

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1、广西农业秤学2010，41(1)：259—262GImngIjAgIicIllturalSciences·259·SD大鼠睾丸支持细胞的分离、培养、纯化及鉴定姚玲-，李春艳1，李晓剑1，黎宗强”，谢丽萍2，张留光1，靖蓓蓓-(1广西大学动物科学技术学院，南宁530005；2广西玮美生物科技有限公司。南宁530023)摘要：为进一步简化、优化SD大鼠睾丸支持细胞的体外培养条件及鉴定方法，采用三酶两步消化法和差异贴壁法分离、培养、纯化sD大鼠支持细胞，并用HE染色、油红染色、Feulgen染色及透射电镜扫描其超微结构予以鉴定。结果表明：平均0．109睾丸组织可获得2．5×10a个支持细

2、胞，细胞存活率90％以上，体外培养5h后开始贴壁，96h后细胞生长速率下降，其对数生长期为3～7d，整个体外生长周期约为lO-15d。对获得的纯化细胞进行鉴定，发现其形态结构及超微结构与支持细胞的形态特征一致。可见，采用三酶两步消化法和差异贴壁法．可达到分离、培养、纯化sD大鼠支持细胞的目的。关键词：睾丸；支持细胞；体外培养；鉴定；SD大鼠中图分类号：$852．1；Q954．6-33+1文献标识码：A文章编号：1002—8161(2010)03-0259--04Isolation，culture，purificationandidentificationonsertolicello

3、fSDratYAOLin91，LIChun-yanl，LIXiao-jianl，LIZong-qiang”，XIELi-ping，ZHANGLiu-guan91，JINGBei-beil(1CollegeofAnimalScienceandTechnology，GuangxiUniversity，Nanning530005，China；2WeimeiBioteehnologyCo．Ltd．，Nanning530023，China)Abstract：Thepresentstudywasconductedtooptimizethe面r／trocultureconditionsandid

4、entiffcationmethodforsertolicellofSDmt．Thesertolicellsfrom21daysoldmaleSDratwereisolated．culturedandpurifiedbytwo-stepdiges-tionusingthreeenzymesanddifferentiatedanchoringmethod．，11他ultrastructureofsertolicellwagidentiffedusingHE．0ilredandFeulgendyesthrough7I’EMscanning．Onanaverage．2．5x106sert

5、olicellscanbeobtainedfromabout0．10goftes-ticletissuewiththesurvivalrateabove90％．n峙cellbegantoanchorafter5hours／nvitroculture．andthegrowthmteofcellsdecreasedafter96h．Thelogarithmicgrowthdurationofcellwaftfoundt0be3-7daysand／nv／frogrowthdurationWag10—15days．Themorphologicalcharacteristicsandultr

6、astructureofpurifiedceilsobservedtlⅡoushTEMrevealeditWaginaccordancewiththatofsertolicell．ThepresentedmetlIodWaSfoundtoaccurateforstudyingthesertolicells．Keywords：testicle；sortoficell；／nv／troculture；identification；SDrat睾丸支持细胞(Sertolicell。SC)是生精细胞的支架，为生精细胞提供必需的营养物质，能合成与分泌雄激素结合蛋白(Androgenbinding

7、protein，ABP)，为生精细胞提供高浓度的雄激素环境等。近年来，关于睾丸支持细胞的研究越来越多，在国内已有不少学者对啮齿动物大鼠[1】、小鼠[z】以及家畜犊牛【31、仔猪[41、兔子[51．甚至家禽鸡[6】的睾丸支持细胞进行详细研究，但目前有关支持细胞分离、纯化等体外培养条件多种多样．其鉴定方法也各不相同。为此，本研究在现有基础上，简化并优化了实验步骤，为支持细胞的培养及鉴定提供更合适的参考。1材料与方法1．1试验动物试验动物为21El龄断奶SD雄性大鼠，由广西