微小核糖核酸21在非小细胞肺癌中表达和意义.doc

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1、微小核糖核酸21在非小细胞肺癌中表达和［摘要］目的探讨微小核糖核酸21(miR-21)在非小细胞肺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法应用qRT-PCR方法检测120例非小细胞肺癌标本和120例癌旁肺组织标本中miR-21的表达水平。结果miR-21在非小细胞肺癌组织中的表达水平明显高于其在癌旁肺组织中的表达水平(P二0.0060)omiR-21的表达情况与非小细胞肺癌患者TNM分期(P二0.0063)、癌细胞分化(P二0.0410)及淋巴结转移(P=0.0197)相关，与性别、病理类型和肿瘤直

2、径无关(均P>0.05)o结论非小细胞肺癌组织中miR-21表达异常提示其可能参与了非小细胞肺癌的发生、发展过程，是一个潜在的非小细胞肺癌分子标志物。［关键词］非小细胞肺癌；microRNA；微小核糖核酸21；qRT-PCR［中图分类号］R734.2［文献标识码］A［文章编号］1673-7210(2013)05(c)-0132-03肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，其中，非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)约占所有肺癌的80%［1］。自Croce研究组2002年首次报道微

3、小核糖核酸(microRNA,miRNA)异常与肿瘤有关以来［2］，越来越多的研究表明，miRNA在肿瘤的发生发展中发挥重要的作用。已有研究证实，微小核糖核酸21（miR-21）在甲状腺乳头状癌、肝癌等多种恶性肿瘤中表达显著上调，且与肿瘤分级呈正相关［3-4］。但目前关于miR-21与NSCLC是否相关的报道较少。本研究拟用实时荧光定量PCR法（qRT-PCR）检测miR-21在NSCLC组织中的表达，初步探讨miR-21表达与NSCLC的发生、分化及转移的关系，为进一步有效诊断和防治肺癌提供理论依据。

4、1资料与方法1.1一般资料收集华中科技大学同济医学院附属同济医院2007年10月〜2011年10月经手术切除的120例NSCLC标本，同时收集上述病例癌旁肺组织120例，所有患者均经术后病理检查证实，且术前均未接受过放化疗或靶向治疗，均有详细的临床资料和手术记录。1.2实时荧光定量PCR法用Trizol试剂（美国Invitrogen公司）提取标本总RNA,miR-21的表达水平采用文献报道的qRT-PCR法进行检测［5］,以U6的小RNA作为内参，采用相对CT值表示［6］。qRT-PCR的操作严格按照S

5、YBRTaqTM预混试剂盒（日本Takara公司）说明书进行。所有标本均于术后30min内获得，用无RNA酶水冲洗以清除可能污染的瘤细胞，液氮速冻后-8CTC冰箱保存。严格按照试剂盒的说明和实验操作要求提取组织RNA及进行cDNA逆转录。miR-21茎环逆转录引物序列为5'-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACTCAACA-3z；PCR扩增上游引物序列为5’-GCCCGCTAGCTTATCAGACTGATG-3z,下游引物序列为5’-GTGCAGGGT

6、CCGAGGT-3A。U6茎环逆转录引物序列为5'-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACAAAAATATG-3'；PCR扩增上游引物序列为5’-GCGCGTCGTGAAGCGTTC-3',下游引物序列为5’-GTGCAGGGTCCGAGGT-3'。1.3统计学方法采用SPSS13.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数土标准差(x±s)表示，两组间比较采用t检验；以P0.05)o见表2。3讨论随着人类后基因组计划的开展，占人类基因组99%的非编码

7、序列日益受到关注，其中，miRNA的发现最引人注目。miRNA是一类全长为19〜25nt的单链小分子RNA,广泛存在于病毒、植物及高等哺乳动物中［7］。自1993年Lee等［7］发现了第一个小分子非编码RNA以来，到2006年人类已发现了超过500种miRNA,可能调控人类基因组中30%的编码基因［8-9］o目前miRNA已知的功能主要是作为基因表达的负调控因子，参与细胞的增殖、凋亡、分化及代谢，但其作用靶点及确切的生物功能尚不明确［10］。研究显示，miRNA可能作为潜在的癌基因或抑癌基因参与多种肿瘤

8、的发生过程［11］。miR-21位于染色体的脆性区域17q23.2,已证实其在多种肿瘤，如甲状腺乳头状癌、肝癌等中表达水平显著上升，发挥着癌基因的作用［3-5］。Yanaihara等［11］利用基因芯片分析发现,NSCLC组织中有43种mi-RNA表达异常，其中，miR-21表达升髙。Seike等［12］在不吸烟者肺癌病例中检测出miR-21呈过表达。本研究结果显示，miR-21在NSCLC组织中表达水平高于癌旁肺组织（P二0.006）,与