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《白细胞中巨细胞病毒抗原检测及在肾移植的临床应用.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、白细胞中巨细胞病毒抗原检测及在肾移植的临床应用【摘耍】目的建立一种新的快速诊断巨细胞病毒(CMV)感染的方法并初步用于肾移植受者。方法采用抗CMV抗原的单克隆抗体，运用免疫组化链菌素-生物素标记法对外周血白细胞核屮CMV抗原(即刻早期抗原和早期抗原)进行染色，诊断CMV感染。结果共检测肾移植受者72例，CMV活动性感染率为47%(34/72),CMV病发病为18%(13/72)oCMV抗原阳性细胞数在CMV活动性感染者中平均为11.5/5万WBC,在CMV病者为20.5±17.8/5万WBC。同时检测10名健康人,结果均为阴性。结论该法具有快速、简便、成
2、本低等优点，且能达到定量检测的目的，可用于临床对CMV感染的早期快速诊断。【Abstract】Objectivetoestablishanewmethodforthediagnosisofhumancytomegalovirus(HCMV)infectionanddiseaseinrenaltransplantrecipients・Methodslabeledstreptavidinbiotin(LSAB)methodwithCMVmonoclonalantibodywasusedtodetectCMVantigeninperipher、albloocl
3、leukocyteSeResultsCMVantigenpositivecellswerecountedinevery5<0104wbc.72renaltransplantrecipientswereinvestigated・TherateofCMVactiveinfectionwas47%(34/72)andtheaveragecountofCMVantigenpositivece11swas11.5/5・0X104WBC.TheincidenceofCMVdiseasewasl8%(13/72)withaCMVantigenvalueof20.5土1
4、7.8/5.0X104WBC.lOhealthypeoplewerealsostudiedandtheresultsofCMVantigenwerenegative・ConclusionsThismethodprovidesarapid,accurate&：nbsp;andlowcostapproachtothediagnosisofCMVinfectionandcanbequantifiedeasily.【Keywords】cytomegalovirusinfectionsAntigens,viralKidneytransplantationLa
5、beledstreptavidinbiotinmethod巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)感染在免疫功能正常的健康人极少出现临床症状，而在免疫功能低下或缺失的患者可能会发展成有严重临床症状的CMV病(或称CMV综合征)，威胁患者的生命。在肾移植受者中，由于免疫抑制剂的应用，CMV感染较为常见，约占50%或以上，其中10%〜30%可发展成CMV病[1],导致移植肾功能丧失或患者死亡。因此，对CMV感染进行早期、准确的诊断具有极其重耍的意义。我们采用免疫组化链菌素-生物素标记(labeledstreptavidinbiotin,LSAB)
6、法对外周血白细胞中CMV抗原进行染色从而诊断CMV感染，并将该方法初步应用于临床，达到了早期、快速诊断的目的，现介绍如下。对象与方法—、研究对彖检测1996年2月〜1997年3月在本院接受肾移植的受者72例，其屮男52例，女20例，年龄26~65岁，平均42.5岁。所有受者术后均用环抱素A+强的松+硫哩卩票吟(CSA+pred+Aza)三联免疫抑制方案。二、设备及试剂普通光学显微镜；CMV单克隆抗体；LSAB试剂盒(购自丹麦DAK0公司，批号为K9002)；Tris碱。三、CMV抗原检测(LSAB法)1•标本收集和处理:外周静脉血3〜5ml,EDTA抗凝
7、,离心5分钟(500r/min),吸取血浆层移入另一离心管。离心8〜10分钟(1000r/min),弃去上清液,加0.83%nH4Cl数滴,冰水中作用5分钟,以溶解混杂的红细胞。加大量Tris-盐酸碱缓冲液(TBS)稀释，离心5分钟(600~800r/min),弃去上清液，加适量TBS,普通光学显微镜下调整细胞浓度(含WBC1.0X106/ml)o2.细胞片制备：微量吸管吸取上述白细胞悬液50ul(含WBC5万个)，加玻片上，面积约2cmX2cm大小，干燥后用4°Ci人j酮固定10分钟，每例标本涂片2张。3.CMV抗原染色：细胞片置0.3%H202中10
8、分钟(室温),以阻断内源性过氧化物酶反应，TBS洗片。滴加1：20倍稀释的正常猪
