类风湿性关节炎患者外周血中性粒细胞MMP―7、EMMPRIN表达及意义.doc

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1、类风湿性关节炎患者外周血中性粒细胞MMP—7、EMMPRIN表达及意义［摘要］目的观察基质金属蛋白酶7（MMP・7）、细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）蛋白及mRNA在类风湿关节炎（RA）患者外周血中性粒细胞中的表达，探讨其与RA相关性及意义。方法采集2014年1月〜2015年5月本溪市中心医院RA患者（RA组）及健康体检者（NC组）外周血中性粒细胞，采用Westernblot及qRT-PCR分别检测MMP-7及EMMPRIN在蛋白及mRNA水平表达，采用酶联免疫法检测血清炎性因子表达，并探讨其意义。结果RA组中MMP-7及EMMPRIN蛋白表达明显高于NC组

2、(匸7・752，6.627,P［关键词］基质金属蛋白酶7；细胞外基质金属蛋白酶诱导因子；类风湿关节炎［中图分类号］R593.22［文献标识码］A［文章编号］1674-4721(2016)04(c)-0046-03ExpressionandmeaningofMMP-7,EMMPRINproteinandmRNAinperipheralpolymorphonuclearleukocytesofrheumatoidarthritispatientsLIWe订WUBao-ping21.DepartmentofEmergency,BenxiCentralHospitalinLiao

3、ningProvince,Benxi117000,China；2.DepartmentofObstetricsandGynecology,CoalGeneralHospital,Beijing100028,China[Abstract]ObjectiveToobservetheexpressionofMMP-7,EMMPRINproteinandmRNAinperipheralpolymorphonuclearleukocytesofRApatientsandtoexploretherelationshipandmeaningwithrheumatoidarthritis

4、.MethodsTheperipheralbloodneutrophilwascollectedfromRApatients(groupRA)andhealthysubjects(groupNC)fromJanuary2014toMay2015inBenxiCentralHospital.WesternblotandqRT-PCRwererespectivelyusedtotestedtheexpressionlevelofMMP-7,EMMPRINproteinandmRNA.Enzymelinkedimmunosorbentassaywasusedtotestedth

5、eexpressionofseruminflammatorycytokinesandthemeaningwasexplored.ResultsTheexpressionofMMP-7andEMMPRINproteiningroupRAwasobvioushigherthanthatofgroupNCrespectively(1=7.752,6.627、P1资料与方法1.1一般资料选择2014年1月〜2015年5月本溪市中心医院以美国风湿病学会2010年修订的类风湿诊断标准诊断的RA患者27例为研究对象（RA组），体检中心27例健康体检者为对照组（NC组）。其中男29例，女

6、25例，年龄（55.64±23.08）岁，两组在年龄、性别方面比较，差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性，无伦理学争议。所有纳入研究患者无心、肺、肝脏、肾脏等重要器官疾病；无其他炎性关节病或伴有其他结缔组织病；无细菌及病毒感染；无肿瘤及血液病；未接受过抗风湿治疗。1.2实验材料粒细胞分离提取试剂盒及Hanks液购自天津TBD公司；兔抗人MMP-7单克隆抗体、兔抗人EMMPRIN单克隆抗体购自美国Sigma公司；miRNA提取分离试剂盒、TRIzol及qPCR试剂盒购自美国GeneCopoeia公司；引物由大连宝生生物技术有限公司设计合成。1.3研究方法1.3.1外

7、周血中性粒细胞的分离取RA组及NC组患者外周抗凝静脉血各10ml,Hanks液等倍稀释。按粒细胞分离提取试剂盒说明书进行中性粒细胞的分离及提取，调整细胞数为1X107进行实验。1.3.2Westernblot按说明书对中性粒细胞全蛋白进行提取，BCA试剂盒蛋白浓度定量，每条泳道上样量20ug,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳转至PVDF膜,加入抗体，ECL发光，凝胶显像仪显像，分析灰度值。1.3.3qRT-PCR法按说明书分离纯化中性粒细胞RNA,浓度稀释为1.0g/L,按反转录-扩增试剂盒说明书进行反转录扩增，反应结束分析溶解曲线。1