糖尿病大鼠椎间盘退变实验观察.doc

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1、糖尿病大鼠椎间盘退变实验观察作者：陈森熊敏余化龙何宁廖梅梅【摘要】目的观察糖尿病大鼠椎间盘的退变情况，探讨糖尿病引起椎间盘退变的可能机制。方法30只雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组，每组15只。实验组采用腹腔单次注射链腺佐菌素溶液(STZ)50mg/kg制成糖尿病模型，正常对照组仅注射等量的枸椽酸缓冲液。分别在建模成功后4、8、12w取椎间盘组织，HE染色观察椎间盘组织病理变化;透射电镜观察髓核细胞及胶原变化;用TUNEL法显示髓核组织细胞凋亡情况，测定凋亡率。结果实验组大鼠注射STZ后，空腹血糖均大于13.8mmol/L((

2、20.27±2.600)mmol/L)。在不同的阶段，实验组椎间盘的退变程度均较重，髓核细胞凋亡率较高。结论糖尿病是影响椎间盘退变的因素之一。【关键词】糖尿病；椎间盘；凋亡[Abstract】ObjectiveToobservethechangesofintervertebraldiscdegenerationofdiabetesratsandexploreitspossiblemechanism・MethodsThirty3monthsoldmaleSDratswererandomlydividedintoexperiment

3、andcontrolgroups(n=15)・Diabetesmelliums(DM)modelwasinducedbyasingleintraperitonealinjectionofstreptozotocin(STZ)solution(50mg/kg)・Theratswerekilledat4,8and12weekslaterandthelumbardiscwasobtained・ThehistologicalchangeswereobservedbyHEstaining・Theultrastnictureofthenuc

4、leuspulpoususwasexaminedbytransmissionelectronmicroscope・Thermcleuspulposusapoptosiswasmeasuredbyimmunohistochemistry.ResuItsThevenousfastingbloodglucoselevelsofallmodelratswereabove13.8mmol/L((20.27+2.600)mmol/L).Comparedtothecontrol,thepathologicandultrastrueturalc

5、hangesweremuchmoreserious・Theapoptosisindexesofnucleuspulposusweresignificantlydifferentbetweenthetwogroups(P&It；0.05).ConclusionsDiabetesmellitusmayacceleratethediscdegenerationinthediabeticrats・[Keywords]Diabetesmellitus；Intervertebraldisc；Apoptosis糖尿病是一组全身性的内分泌代谢性

6、疾病，其慢性并发症几乎涉及到全身各器官组织。糖尿病微血管改变除了引起糖尿病视网膜病变、糖尿病肾病、糖尿病心肌病变外(1,2)。Ziv等人的研究〔3)证实糖尿病会影响到椎间盘组织。Mobbs等人(4)报告患有糖尿病的腰椎间盘突出症患者手术后效果的优良率明显低于非糖尿病患者，且术后复发率也较高，其原因还不清楚。本实验探讨大鼠糖尿病和椎间盘退变之间的关系。1材料与方法1.1动物模型的制备和取材1.1.1动物模型的制备体重200〜250gSD雄性大鼠30只（由武汉大学实验动物中心提供），随机分为对照组15只和实验组15只。用快速血糖仪（

7、美国强生公司，OneTouchII）测定大鼠尾静脉血糖。禁食24h后，实验组大鼠,腹腔单次按50mg/kg注射链腺佐菌素溶液（STZ,美国Sigma公司），用枸椽酸钠缓冲液溶解（pH=4.5）o对照组仅给予等量枸椽酸钠缓冲液腹腔注射。空腹血糖持续3d^l3.8mmol/L为糖尿病大鼠模型。1.1.2实验取材分别于造模成功后4、8、12w时，每只动物称取体重后，戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉,解剖后迅速钳取全段腰椎，取腰5/6椎间盘组织（包括终板、髓核和纤维环）,10%甲醛固定，制成蜡块。1.2椎间盘组织学观察采用石蜡切片，

8、切片厚6urn,作普通HE染色，观察椎间盘组织形态及病理变化。31.3椎间盘超微结构观察每组随机取两个椎间？（腰2/3）,送武汉大学医学院电镜室常规制样，用透射电子显微镜观察终板微血管内皮细胞形态及椎间盘的相关结构。1.4髓核细胞凋亡率的测定末端脱氧核糖核酸转移