实验六肝炎甲乙丙的意义.ppt

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1、实验六实验六一、乙型肝炎表面抗原（HBsAg）测定二、分析肝炎标志物检验结果三、类风湿因子（RF）的测定四、分析生化全项结果一、乙型肝炎表面抗原（HBsAg）测定乙型肝炎的病原体是乙肝病毒（HBV），由于至今还不能成功地对该病毒进行分离培养，所以，乙肝的诊断主要依赖于乙肝标志物（HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、抗－HBc)的检测，在大型医院检验科应用PCR技术进行HBVDNA（乙肝核酸）检测，来判断HBV是否复制，乙肝患者传染性强弱。HBsAg是临床使用最广泛的诊断乙肝的指标。因此，本实验来介绍HBsAg的检测

2、。常用方法★1、ELISA★2、金标法洗板待测抗原底物温育显色E酶标抗体EEEEEEEE洗板固相抗体1、ELISA结果判断按照试剂盒确定的Cut-off值判断结果ELISA测定的“灰区”（可疑结果的含义）定性酶免疫测定的CUT-OFF值2、HBsAg胶体金法【测定原理】HBsAg胶体金法检测试剂条采用高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术，试剂条含有被预先固定于膜上测试区（T）和质控区（C）的抗体。双抗体夹心法G区：金标特异性抗体(兔型)C区：羊抗兔IgT区：特异性抗体吸水纸标本这条带是HBsAg抗体-HBsAg-金标粒子

3、的复合物在膜上结合形成的。如是阴性，则测试区（T）内将没有紫红色条带。无论HBsAg是否存在于标本血样中，一条紫红色条带都会出现在质控区（C）内。质控区（C）内所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。【操作步骤】在进行测试前必须先完整阅读使用说明书，使用前将试剂条和血样标本恢复至室温（20℃-30℃）。1．从原包装铝箔袋中取出试剂条，在1小时内应尽快地使用。2．将试剂条插入血清/血浆标本中。注意：血清/血浆标本液面不能超过试剂条的标记线。3．等待紫红色条带的出现，测试结果应在1

4、5分钟时读取。30分钟后判定无效。弱阳性标本会在15分钟至30分钟出现T线。【结果判定】阳性（+）：两条紫红色条带出现。一条位于测试区（T）内，另一条位于质控区（C）。阳性结果表明：标本中含有乙肝表面抗原（HBsAg）。阴性（-）：仅质控区（C）出现一条紫红色条带，在测试区（T）内无紫红色条带出现。阴性结果表明：标本中检测不出乙肝表面抗原（HBsAg）。无效：质控区（C）未出现紫红色条带，表明不正确的操作过程或试剂条已变质损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂盒重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品

5、，并与当地供应商联系。金溶胶标记蛋白质，胶体金颗粒具有高电子密度的特性，故在金标蛋白的抗原抗体结合处，显微镜下可见黑褐色颗粒；当这些标记物在相应的标记处大量聚集时，可在载体膜上呈现肉眼可见红色或粉红色斑点(线)，从而用于抗原或抗体物质的定位或定性。注意：测试区（T）内的紫红色条带可显现出颜色深浅的现象。但是，在规定的观察时间内，不论该色带颜色深浅，即使只有非常弱的色带也应判为阳性结果。【灵敏度和特异性】HBsAg试剂条在15分钟时可检测出5ng/mlHBsAg，30分钟时可检测出1ng/mlHBsAg。并与ELISA试剂条比较

6、，实验表明HBsAg试剂条的灵敏度可达到99.7%，特异性为99.66%。二、分析肝炎标志物检验结果（一）乙型肝炎的诊断标志物乙型肝炎表面抗原（HBsAg）乙肝病毒前S1抗原抗乙肝病毒前S1抗体乙肝病毒前S2抗原抗乙肝病毒前S2抗体乙型肝炎核心抗原（HBcAg）乙肝核心抗体-IgG乙型肝炎表面抗体（抗-HBs）乙型肝炎e抗原（HBeAg）乙型肝炎e抗体（抗-HBe）乙肝核心抗体-IgM乙型肝炎表面抗原(HBsAg)生物学性状存在于Dane颗粒的表面位于病毒表面是一种糖蛋白4种亚型(adr,adw,ayr,ayw)判断HBV感染

7、的指标之一刺激机体产生保护性抗体即抗-HBs乙型肝炎病毒(HepatitisBVirus)Dane颗粒(schematicSurfaceAgCoreAg(also“e”Ag)DNAHBV阳性血清电镜图Dane颗粒检测方法：SPRIA（固相放射免疫法）ELISA（酶联免疫吸附试验）RPHA（反向间接血凝试验）化学发光法可对血清中的HBsAg进行定量检测，对肝炎病人动态疗效观察很有价值临床意义（1）乙肝的筛选和普查。（2）HBsAg阴性不能完全排除乙型肝炎。（3）同时出现HBsAg和抗-HBs，可能是不同亚型重复感染。（4）如果

8、仅表现为HBsAg阳性者，传染性较弱。乙型肝炎表面抗体(HBsAb)生物学性状是一种保护性抗体位于病毒表面是机体感染或接种乙肝疫苗的标志如一过性HBsAg阳性，则抗-HBs可以为阴性临床意义（1）抗-HBs阳性提示急性感染后的康复。（2）在接受抗-HBs阳性血液的受血者中，可