一位论坛会员朋友关于痰涂片的解答.doc

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1、一位论坛会员朋友关于痰涂片的解答（by巴斯德之徒）此帖转自微生物之家论坛，看到对从事微生物工作的朋友很有价值，转过来供医内网的朋友学习一下。以下是一位来自郑州的微生物之家论坛的会员朋友给我的信件：我做出了如下的回答：希望有类似问题的朋友积极讨论。目前我们开展痰涂片已经一段时间了，现将一些关于痰涂片的疑问请教巴老师。1.      关于涂片和染色方法。我们现在是不洗涤直接涂片染色。实际工作中遇到的问题是：有时浓痰不好涂匀，染色时不好掌握脱色时间（有时脱色过度，有时脱色不足），有时片上残留有染料结晶，影响读片。我需要关于不同标本具体涂片方式方面的资料，我只找到

2、一篇四军大的过样豹老师的论文《原始标本涂片检查对微生物检验全过程的导航作用》文中只简单提到涂抹法、压片法等，没有具体阐述。不知老师有这方面的资料或经验能与我分享吗？您们对于不同标本涂片方法尤其是痰涂片染色方法有什么技巧或经验吗？对于痰涂片最好洗涤后在涂，杂菌少些，便于读片；涂片采用压片法，我在上次的邮件中已经详细叙述，再仔细读读。关于Gram染色的效果与染料和染色技术都有密切关系，我曾在论坛上发过我的改良染色液及相应的染色法，到论坛搜搜看。染得好菌落涂片，不一定染得好痰片，后者最考验技术。2.      关于直接涂片和培养不一致情况。通过涂片和培养对照，发

3、现有时不一致。具体表现在：①涂片不合格（上皮细胞＞25/lp，白细胞＞或＜10/lp），平板上见到大量革兰阴性杆菌（++到+++）和少量革兰阳性球菌或杆菌。这时是否需要鉴定优势的革兰阴性杆菌？还是报正常菌群？②痰液稀薄像口水，涂片上几乎未见细胞（白细胞和上皮细胞均＜10/lp）和细菌，平板上见少量阴杆（+）和阴球（多为奈瑟菌+到++）。直接涂片上无细胞和细菌见于那些情况？如果是口水不是应该有大量上皮和杂菌吗？以上两种情况我们不会接种的，所以也就不存在不符合的说法——既然标本都不合格就没有必要做的，浪费资源，出的结果还等于垃圾。③涂片合格但白细胞内未见细菌，

4、平板上优势菌与涂片上优势菌不一致。是否需要进一步鉴定？鉴定哪种菌？要在白细胞内找细菌，首先片子必须染好，细菌一般是在中性粒细胞中的，要看到胞浆中的细菌就必须要求染出的片子中的白细胞是被压扁的，这样显得体积大些，便于观察；其次，胞浆和胞核对比度强烈，胞浆着色浅，如果有细菌一目了然；其三，搜寻的部位是白细胞较密集，但互相不重叠挤压，旁边没有细菌球（团块状正常菌群集落）或者上皮细胞，否则粘附现象会很重，可能导致你的判断错误。如果片子染色很好，胞外也很少有正常菌群，连续看上20~50个视野都没有发现脓细胞胞内有细菌的话，可能该标本是一个经过治疗后采集的痰液，细菌已

5、经被抗生素抑制或杀灭了；抑或是象结核杆菌、肺炎支原体或嗜肺军团菌等导致的，采用Gram染色是看不到病原体的，必须采用特殊染色法——对于这样的标本，次日培养物是不需要处理的，直接报告阴性即可。如果你们还做了特殊染色，并发现问题，就可以向临床建议，让他们加做这些特殊病原体的培养，例如结核杆菌培养、肺炎支原体检测等。④涂片合格并见到白细胞吞噬细菌（一般为G+球菌），可平板上白细胞内吞噬菌不占优势或根本见不到，而涂片上未见细菌（一般为G—杆菌）平板上却有生长（+）。这种现象可能原因？该怎样报告结果？一定要以读片为准，不要去管它什么优势菌与否，我反复强调，关于优势菌

6、的理论只能用在肠道菌群变化的解释上，不能用于痰培养病原菌的确证上，这个理论用于痰培养根本就是一个错误！你要学会将镜下形态和菌落形态以及菌落涂片形态联系起来的思维方法，要学会正确辨认痰涂片中的有意义细菌和该细菌在培养基的上可能会出现的菌落形态——如果一旦发现，不管量的多少，都要传代分纯。而有些情况下，见到的细菌你不一定都能培养得出来，例如如果感染菌是一厌氧菌，你采用普通环境培养就肯定不会生长的。再有就是苛养菌，目前很多医院都是使用的商品化血琼脂，几乎分离不出肺炎球菌的。巧克力培养基质量也奇差。看到细菌但分离不出来也就顺理成章了——即使自己做培养基也存在问题，

7、动物血源就是个大问题，山羊血与人血都是不允许做培养基的，因为效果实在太差！对此你们只能加强首代分离培养基的质量控制（血琼脂必须用淋球菌、肺炎球菌、酿脓链球菌进行试验），选一家质量好的使用。另外就是抗生素的经验性应用也是导致这种改变的原因。涂片未见细菌而培养生长的情况一般分两种，其一是生长的细菌根本就是定植菌，且量少，涂片时由于受显微镜所见的范围的限制没有被注意到，而接种的量一般都比涂片的量大，长出细菌很正常。这样的情况一般无需处理；其二就是由于抗生素的经验性应用使得细菌细胞壁缺陷，发生L型变异，形态随之改变，染色特性也发生改变，没有L型菌研究经验的实验人员

8、是无法正确辨认痰片中的L型菌体的，这种情况必须要有相关经验老师的带