流产布鲁氏菌bp26和omp10基因的同源性分析_王军.pdf

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1、中国兽医科学２０１１，４１（０１）：２５－３０ＣｈｉｎｅｓｅＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＳｃｉｅｎｃｅ中图分类号：Ｓ８５２．６１４文献标志码：Ａ文章编号：１６７３－４６９６（２０１１）０１－００２５－０６流产布鲁氏菌ｂｐ２６和ｏｍｐ１０基因的同源性分析王军１，王瑞２，申之义２，杨莲茹２（１．内蒙古大学生命科学学院，内蒙古呼和浩特０１００２１；２．内蒙古农业大学兽医学院，内蒙古呼和浩特０１００１８）摘要：利用布鲁氏菌外膜蛋白ｂｐ２６基因和ｏｍｐ１０基因，对分离的布鲁氏菌和参考布鲁氏菌菌株进行克隆和序列分析，以明确分离的布鲁氏菌和参考布鲁氏菌菌株与基因库中的布鲁氏菌外膜蛋白

2、ｂｐ２６基因和ｏｍｐ１０基因间的同源性。根据ＧｅｎＢａｎｋ中的布鲁氏菌ｂｐ２６基因和ｏｍｐ１０基因，分别设计合成了１对特异性引物，以提取的分离株布鲁氏菌和２株参考布鲁氏菌的总ＤＮＡ为模板，通过ＰＣＲ技术扩增得到了ｂｐ２６基因和ｏｍｐ１０基因，回收纯化后将这２个基因分别连接到ｐＭＤ１８－Ｔ载体上，热激发转化受体菌大肠杆菌ＤＨ５α，并进行质粒提取、ＰＣＲ鉴定和测序。结果表明，ｂｐ２６基因全长为９９５ｂｐ，包含１个由７５３ｂｐ的核苷酸组成的完整开放阅读框，分离菌株的同源性为１００％，与参考菌株Ｍ５、Ｓ２的同源性分别为１００％和９９．９％，与参考序列Ｓ１９、８７０的同源

3、性分别为９９．９％和１００％；ｏｍｐ１０基因全长５３１ｂｐ，包含１个由３９６ｂｐ的核苷酸组成的完整开放阅读框，分离菌株的同源性为１００％，与参考菌株Ｍ５、Ｓ２的同源性均为１００％，与参考序列５４４的同源性为９９．７％。证实ｂｐ２６基因和ｏｍｐ１０基因在各种型间的同源性都在９９％以上，表明这２个基因在布鲁氏菌属的细菌中是高度保守的。关键词：布鲁氏菌；ｂｐ２６基因；ｏｍｐ１０基因；同源性；分析Ｉｄｅｎｔｉｔｙａｎａｌｙｓｉｓｏｆｂｐ２６ａｎｄｏｍｐ１０ｇｅｎｅｓｏｆＢｒｕｃｅｌｌａａｂｏｒｔｕｓ１，ＷＡＮＧＲｕｉ２，ＳＨＥＮＺｈｉ－ｙｉ２，ＹＡＮＧＬｉａｎ－ｒｕ２Ｗ

4、ＡＮＧＪｕｎ（１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｏｈｈｏｔ０１００２１，Ｃｈｉｎａ；２．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｏｈｈｏｔ０１００１８，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅａｉｍｏｆｔｈｅｐｒｅｓｅｎｔｓｔｕｄｙｗａｓｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｉｄｅｎｔｉｔｙｏｆｇｅｎｅｓｃｏｄｉｎｇｆｏｒＢｒｕｃｅｌｌａｏｕｔｅｒｍｅｍｂｒａｎｅｐｒｏｔｅｉｎｓＢＰ２６ａｎｄＯＭＰ１０ａｍｏｎｇＢｒｕｃｅｌｌａｏ

5、ｆｔｅｓｔｉｎｇｏｒｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓｔｒａｉｎｓａｎｄＧｅｎＢａｎｋｓｔｒａｉｎｓ．ＴｗｏｐａｉｒｓｏｆｐｒｉｍｅｒｓｓｐｅｃｉｆｉｃｔｏＢｒｕｃｅｌｌａｂｐ２６ａｎｄｏｍｐ１０ｇｅｎｅｓｗｅｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄａｎｄｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏＧｅｎＢａｎｋｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ｂｐ２６ａｎｄｏｍｐ１０ｇｅｎｅｓｗｅｒｅａｍｐｌｉｆｉｅｄｂｙＰＣＲｆｒｏｍｔｈｅｇｅｎｏｍｉｃＤＮＡｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｔｅｓｔｉｎｇｏｒ２ｒｅｆｅｒｅｎｃｅＢｒｕｃｅｌｌａｓｔｒａｉｎｓ．ＴｈｅＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔｓｗｅｒｅｃｌ

6、ｏｎｅｄｉｎｔｏｔｈｅｐＭＤ１８－Ｔｖｅｃｔｏｒａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅｄ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｐｌａｓｍｉｄｓｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＤＨ５α．ＴｈｅｅｘｔｒａｃｔｅｄｐｌａｓｍｉｄＤＮＡｗｅｒｅｃｏｎｆｉｒｍｅｄｂｙＰＣＲａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｂｐ２６ｇｅｎｅｗａｓ９９５ｂｐｉｎｌｅｎｇｔｈｃｏｎｔａｉｎｉｎｇａｃｏｍｐｌｅｔｅ７５３ｂｐｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ（ＯＲＦ）．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｒ

7、ｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔｔｈｅｉｄｅｎｔｉｔｙｏｆｂｐ２６ｇｅｎｅｓｉｎｔｈｅｔｅｓｔｉｎｇｓｔｒａｉｎｓｗａｓ１００％，ａｎｄｔｈｅｔｅｓｔｉｎｇａｎｄｔｈｅｒｅｆｅｒｅｎｃｅＭ５ｏｒＳ２ｓｔｒａｉｎｓｗａｓ１００％ｏｒ９９．９％，ａｎｄｔｈｅｔｅｓｔｉｎｇｓｔｒａｉｎｓａｎｄｔｈｅｒｅｆｅｒｅｎｃｅＳ１９ｏｒ８７０ｓｅ－ｑｕｅｎｃｅｓｗａｓ９９．９％ｏｒ１００％．Ｔｈｅｏｍｐ１０ｇｅｎｅｗａｓ５３１ｂｐｉｎｌｅｎｇｔｈｃｏｎｔａｉｎｉｎｇａｃｏｍｐｌｅｔｅ３９６ｂｐＯＲＦ．Ｔｈｅｉｄｅｎｔｉｔｙｏｆｏｍｐ１０ｇｅｎｅａｍｏｎｇｔｈｅｔｅｓｔｉｎｇｓｔｒａｉｎｓ

8、ｗａｓ１００％，ｔｈｅｔ